Wnt2B及PAI-1在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的 通过检测Wnt2B与PAI-1在上皮性卵巢癌中的表达,分析两者与上皮性卵巢癌侵袭转移及临床病理之间的关系,以探讨两种基因在上皮性卵巢癌的表达及临床意义.方法 应用免疫组化(SP法)检测2008年1月到2013年6月在本院行手术切除的上皮性卵巢癌82例和良性卵巢上皮瘤10例患者组织中Wnt2B和PAI-1蛋白的表达情况,分析上皮性卵巢癌的年龄、组织学类型、细胞学分级、手术病理分期、肿瘤病灶大小、盆腔转移灶大小、大网膜转移、淋巴结转移、远处转移、残留病灶大小等临床病理因素与两个基因的表达关系;分析上皮性卵巢癌患者癌组织中Wnt2B与PAI-1的表达关系.结果 上皮性卵巢癌患者癌组织中Wnt2B的阳性表达率为12.2％(10/82),低于良性卵巢上皮瘤患者瘤组织的70％ (7/10)(P＜0.05);上皮性卵巢癌患者癌组织中PAI-1的阳性表达率为76.8％(63/82),高于良性卵巢上皮瘤患者瘤组织的20％ (2/10) (P＜0.05).PAI-1的表达与手术病理分期、细胞学分级、大网膜转移、盆腔转移灶大小有关(均P＜0.05),而与患者年龄、组织学类型、肿瘤病灶大小、淋巴结转移、远处转移、残留病灶大小无关(均P＞0.05);Wnt2B表达与手术病理分期、大网膜转移有关(均P＜0.05),与患者年龄、组织学类型、细胞学分级、肿瘤病灶大小、盆腔转移灶大小、淋巴结转移、远处转移、残留病灶大小无关(均P＞0.05).上皮性卵巢癌患者癌组织中Wnt2B与PAI-1的表达呈负相关(r=-0.847,P＜0.05).结论 Wnt2B在上皮性卵巢癌的发病机制中可能发挥一定的作用.PAI-1的表达与上皮性卵巢癌的发生、发展、浸润、转移有关.     

柯萨奇-腺病毒受体不同胞内功能域缺失突变载体的构建与表达

背景与目的：柯萨奇-腺病毒受体（Coxsackie and adenovirus receptor,CAR）是具有复杂生物学功能的黏附分子,已被证实与多种肿瘤的发生和转移有关,但具体作用机制还不清楚。本研究以CAR蛋白结构的功能解析作为切入点,构建不同CAR胞内域缺失突变的表达载体。方法：利用定点缺失突变策略构建了CAR胞内PKC、CK2、TYR磷酸化位点的缺失突变体及胞内域完全缺失的突变体pTOPOTailless。利用三步PCR法扩增获得CAR胞内段不同突变体的基因片段后,将其克隆入真核表达载体 pcDNA3.1/V5/His,通过双酶切及测序进行鉴定后,采用脂质体法分别转染至低表达CAR的人卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,并用Werstern blot检测细胞转染后CAR的表达水平。结果: CAR胞内段不同突变载体成功构建。各突变体转染SKOV3细胞后,其蛋白表达水平均显著增加。结论: 成功构建不同CAR胞内功能域缺失突变表达载体,并在卵巢癌细胞SKOV3获得了满意的表达,为后续研究CAR及其胞内不同功能域在卵巢癌中的作用机制提供了研究基础。     

Netrin-4在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:研究Netrin-4在卵巢癌中的表达情况及其临床意义。方法:利用CSIOVDB数据库分析Netrin-4在卵巢癌中的表达情况及其与肿瘤的分期、分级、EMT和对化疗敏感性的关系。利用KM plotter数据库分析Netrin-4表达与卵巢癌预后的关系。结果:Ⅰ期卵巢癌中Netrin-4表达量明显高于Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期,差异均有统计学意义(P0.01),Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期比较无明显差异(P0.05)。Spearman相关分析表明,Netrin-4表达量与EMT得分呈负相关(相关系数Rho=-0.149330,P0.001)。化疗耐药卵巢癌患者的Netrin-4表达明显降低(P0.01)。KM Plotter预后相关分析显示,Netrin-4低表达与卵巢癌的无进展生存率低(HR=0.75,P0.01)和总生存率低相关(HR=0.81,P0.05)。结论:Netrin-4表达与卵巢癌的恶性程度、分期、分级、EMT及患者的预后相关,可能作为卵巢癌治疗和预后相关的分子靶点。     

蛋白酶体抑制剂联合紫杉醇对卵巢上皮性癌细胞药物敏感性的影响

目的 研究蛋白酶体抑制剂波替单抗与紫杉醇单独作用及联合作用于卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞株SKOV3的效果,并对其诱导细胞凋亡的分子机制进行探讨.方法 波替单抗与紫杉醇单独或联合(50 nmol/L波替单抗、90 nmol/L紫衫醇或50 nmol/L波替单抗+90 nmol/L紫衫醇)作用于SKOV3细胞后,四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞增殖活性并计算细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测磷酸化蛋白激酶B(AKT)和磷酸化糖原合成酶激酶3β(CSK-3β)蛋白的表达水平.结果 波替单抗与紫衫醇联合作用于SKOV3细胞,12、24、36、48及72 h各时间点的细胞存活率分别为(65.2±5.8)%、(58.3±14.4)%、(35.3±5.0)%、(19.2±1.5)%和(11.4±2.5)%,与单用紫杉醇比较,细胞增殖抑制效果增强,各时间点分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).单用紫杉醇、单用波替单抗和两者联用的细胞凋亡率分别为(14.7±0.5)%、(15.1±0.8)%和(20.5±0.7)%,波替单抗与紫杉醇联用的细胞凋亡率明显增高,分别与单用紫杉醇或单用波替单抗比较,差异均有统计学意义(P<0.05).不同药物处理细胞后,磷酸化AKT和磷酸化GSK-3β蛋白的表达水平均有不同程度降低,以波替单抗与紫杉醇联用者降低最为明显[分别为(3.2±0.8)%、(19.3±0.4)%],分别与单用紫杉醇、单用波替单抗、正常未处理细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 蛋白酶体抑制剂波替单抗与紫杉醇联用能增强卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性;AKT/GSK-3β信号通路可能在波替单抗与紫杉醇联用诱导细胞凋亡中发挥了重要作用.     

人卵巢癌细胞SKOV3对硼替佐米和紫杉醇联合应用的药物敏感性及可能机制

背景与目的:蛋白酶体抑制剂硼替佐米是新型抗癌药物,体外对多种恶性肿瘤细胞均具有良好的疗效.本实验研究硼替佐米与紫杉醇单独及联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3的存活率和凋亡率的影响,并对糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和髓样白血病-1基因(Mcl-1)在其诱导细胞凋亡中的作用机制进行探讨,为临床治疗卵巢癌提供理论依据.方法:用50 nmol/L硼替佐米、90 nmol/L紫衫醇,或50 nmol/L硼替佐米联合90 nmol/L紫衫醇分别作用于SKOV3细胞12、24、36、48及72 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性,并计算细胞存活率,Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测相关蛋白表达水平.结果:50 nmol/L硼替佐米和90 nmol/L紫衫醇联合作用于SKOV3细胞,12、24、36、48及72 h时间点细胞存活率分别为(65.2±5.8)%,(58.3±14.4)%, (35.3±5.0)%,(19.2±1.5)%和(11.4±2.5)%,与紫杉醇单用组比较,细胞生长抑制增强,差异有显著性(P<0.05).药物单独或联合作用细胞24 h后,紫杉醇单用组、硼替佐米单用组和两者联用组细胞凋亡率分别为(14.7±0.5)%、(15.1±0.8)%和(20.5±0.7)%,硼替佐米与紫杉醇联用组凋亡率显著增高(P<0.05).药物处理细胞后,经免疫印迹法检测p-GSK-3β和Mcl-1蛋白表达水平,硼替佐米与紫杉醇联用组p-GSK-3β和Mcl-1表达水平降低最为明显,分别为正常细胞组表达水平的(19.3±0.4)%和(31.6±3.1)%,差异均有显著性(P<0.05).硼替佐米和紫杉醇单用组中p-GSK-3β表达水平有所降低,分别为正常细胞组的(78.7±1.2)%和(85.1±1.6)%,Mcl-1表达水平分别为对照组的(68.2±4.5)%和(57.0±4.1)%,差异均具显著性(P<0.05).结论:硼替佐米与紫杉醇联用能增强人卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性,并促进GSK-3β磷酸化Mcl-1,使其降解,诱导细胞,GSK-3β/Mcl-1信号通路可能在硼替佐米与紫杉醇联用诱导凋亡中发挥了重要作用.     

柯萨奇-腺病毒受体在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:研究柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在宫颈癌组织中的表达及意义,探讨其在宫颈癌形成和演进过程中的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测10例正常宫颈组织、72例宫颈原位癌以及浸润癌组织中CAR表达水平,分析评价其临床意义,预测CAR表达与宫颈癌发生发展的关系。结果:与正常宫颈组织相比,宫颈癌组织普遍存在CAR表达下调(P<0.001),CAR的表达与宫颈癌的临床分期、组织学分级和淋巴结转移无关(P>0.05);CAR的表达在宫颈癌组织病理类型中的差异有统计学意义,即宫颈腺癌组织中CAR表达明显高于鳞癌(P<0.05)。结论:在绝大多数宫颈癌组织中存在CAR表达下调;CAR表达变化与宫颈癌灶的组织类型相关,可以作为宫颈癌发生、发展及临床转移的重要生物学指标,其具体作用机制值得进一步研究。     

难治性功能性子宫出血患者行子宫全切术后生活质量的影响因素分析

目的:分析难治性功能性子宫出血患者行子宫全切术后生活质量的影响因素,重点研究经阴道子宫全切术对改善患者生活质量价值。方法:纳入2007年1月至2012年12月于我院行子宫全切的难治性功血患者471例,出院2年后统计其阴道顶端脱垂得分、压力性尿失禁程度、女性性功能诊断适用量表得分、更年期综合征发生情况,以此评估生活质量并将患者划分为生活质量良及差组。同时统计患者年龄、职业、学历、心血管疾病史、吸烟史、基线雌二醇、手术方式,行单因素及多因素回归分析,明确患者生活质量的独立影响因素。结果:单因素分析显示年龄、吸烟史、基线雌二醇、手术方式可能影响患者术后生活质量;多因素回归分析表明年龄、手术方式为术后生活质量的独立影响因素,上述对比均有统计学意义(P0.05)。结论:手术方式是难治性功血患者行子宫全切后生活质量的独立影响因素之一,阴式子宫切除术有助于预防患者生活质量下降。     

硼替佐米联合顺铂对卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞化疗敏感性的影响

Objective To explore the sensitivity and the molecular mechanism of cisplatinresistance ovarian cancer cell line C13 to proteasome inhibitors and the combination with cisplatin. Methods After different treatments, methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay was applied to examine the cell viability, annexin-V/propidium iodide(PI) apoptosis detection kit was used to determine the apoptosis rate of different groups, western blot assay was introduced to evaluate the expression levels of Fas-associated death domain-like interleukin-1 beta converting enzyme inhibitory protein (cFLIPs), and the activity of caspase-8 was examined. Results MTT assay shown that the cell viability ratios of combination group at serial time points from 12, 24, 36, 48, 60, 72 hours were ( 56.0 ± 8.4 ) %, (44.7 ± 7.3 ) %, ( 33.7 ±11.2) %, (27.6 ± 8.0) %, (27. 6 ± 7.6) % and (28.1 ± 2.4) %, which were much lower than those of cisplatin group (P <0.05). After treated for 24 hours, apoptosis rates of cisplatin group, bortezomib group and combination group were ( 16.7 ± 1.7) %, (23.4 ± 2.1 ) % and (26.9 ± 1.6) %, respectively. The rate of combination group was much higher than that of non-treated group and that of cisplatin group or bortezomib group ( P < 0.05 ). Western blot assay showed the changes of expression levels of cFLIPs, which were downregulated seriously after cisplatin, bortezomib or combination treatment [ (43.2 ± 2.3 )% vs( 75.7 ± 3.0)%vs (67.9 ± 2.1 ) %, P < 0.05 ]. The caspase-8 activity of combination group was (5.6 ± 1.6) folds than that of non-treated group, which was higher than those of other two groups [ ( 2.3 ± 1.0) and (4.2 ± 0.9 ) folds,P < 0.05 ]. Conclusions The tumor cell lethal effect of cisplatin could be increase significantly by the combination application of proteasome inhibitors, bortezomib. And the cFLIPs/caspase-8 signaling pathway may be play an important role in the molecular mechanism of the combination treatment.     

基于MR-T2WI纹理特征的决策树分类分析在FIGO-Ⅱ期宫颈癌宫旁浸润中的诊断价值

【摘要】目的：探讨基于MR-T2WI纹理特征的决策树分类分析所建立的分类预测模型对FIGO-Ⅱ期宫颈癌宫旁浸润的诊断价值。方法：搜集本院经手术或活检病理证实的连续90例FIGO-Ⅱ期宫颈癌患者的MRI资料,其中FIGOⅡB期宫旁浸润组45例,FIGO-ⅡA期非宫旁浸润组45例。使用Mazda软件在MR-T2WI上提取宫颈癌的794个纹理参数,经过特征选择降维得到10个纹理参数,比较2组中这10个MR纹理参数值的差异,选取差异具有统计学意义的参数作为自变量,采用SPSS软件进行决策树分类分析,并采用ROC曲线分析决策树模型的诊断效能。结果：采用卡方自交互侦测决策树（CHAID）、穷举CHAID、快速无偏和高效统计树（QUEST）和分类回归树（CRT）四种决策树方法成功建立了能够判断宫旁浸润与非宫旁浸润的预测模型,4种决策树预测模型的分类诊断符合率分别为86.7%、83.3%、92.2%和82.2%,ROC曲线下面积分别为0.867、0.833、0.922和0.822,敏感度分别为91.1%、77.8%、93.3%和82.2%,特异度分别为82.2%、88.9%、91.1%和82.2%。结论：基于MR-T2WI纹理特征的决策树分类分析能准确判断FIGOⅡ期宫颈癌的宫旁浸润情况,其中以分类回归树（CRT）生长法的鉴别诊断效能最佳。