重组可溶性MHC Ⅰ类相关蛋白A对NK细胞生物学活性的影响

目的:研究体外重组可溶性MHC Ⅰ类相关蛋白A(sMICA)对NK细胞杀伤靶细胞活性、分泌IFN-γ、增殖和凋亡的影响.方法:将重组sMICA蛋白与人外周血NK细胞相互作用过夜后,流式细胞仪检测NK细胞杀伤K562靶细胞的能力;ELISA检测培养上清IFN-γ浓度;MTS/PMS法检测sMICA对NK细胞增殖的影响;给NK细胞标记Annexin V和碘化丙啶检测凋亡情况.结果:可溶性MICA抑制NK细胞杀伤K562细胞的活性,下调IFN-γ的分泌,却对NK细胞的增殖和凋亡没有影响.结论:肿瘤细胞表面脱落的sMICA抗原可通过抑制NK细胞活性而逃逸机体的免疫监视功能.     

放疗对食管癌患者血清可溶性MICA含量及外周血NK细胞功能的影响

目的探讨经不同剂量高能X线照射后食管癌患者血清可溶性MHC—I类分子链相关基因A（sMI-CA）含量、自然杀伤细胞（NK细胞）表面NK细胞2族成员D（NKG2D）受体的表达及其杀伤毒性的变化。方法采用ELISA法检测中晚期食管癌患者（n=28）和正常对照（n=21）血清sMICA的含量,并动态分析6例食管癌患者经不同剂量高能X线照射后血清sMICA含量的变化。采用流式细胞术检测NK细胞NKG2D受体的表达,胞内染色法分析NK细胞杀伤靶细胞功能的变化。结果与正常对照相比,食管癌患者血清sMICA含量明显升高,但不同放疗剂量对食管癌患者血清sMICA含量无显著影响。食管癌患者外周血阳性表达NKG2D的NK细胞比例与正常对照相比显著降低,同时其细胞毒活性亦明显降低。而且与治疗前相比,40～60Gy的放疗剂量时NKG2D阳性的NK细胞数增加,同时其NK细胞毒活性最强。结论放疗对食管癌患者血清sMICA含量无明显影响,但适量放疗可使NK细胞毒活性增强。     

高能X线照射对肿瘤细胞表达MICA及NK细胞功能的影响

目的探讨肿瘤细胞接受不同剂量高能X线照射后，细胞表面MICA抗原表达及对NK细胞功能的影响。方法分别取T淋巴细胞株他、结肠腺癌细胞株LS-174-T及食管鳞癌细胞株ECA-109，经0、4、8、16、32Gy的剂量照射，16h过夜培养，给细胞标记MICA的单克隆抗体，分析肿瘤细胞平均荧光密度（MFI的变化。并将外周血单个核细胞与经优化剂量照射的肿瘤细胞按10：1比例孵育，4h后利用流式细胞术胞内染色法分析NK细胞释放穿孔素的情况以评价NK细胞的杀伤毒性。结果不同肿瘤细胞株上调MICA表达的最佳放疗剂量不同，而肿瘤细胞上调MICA表达后可增强NK细胞的杀伤毒性。结论适宜的放射剂量促进肿瘤细胞表达MICA抗原而增强机体免疫功能。     

小鼠CD86基因启动子的构建及活性分析

为构建小鼠CD86启动子,并对其特异性调控能力进行鉴定。首先自C57BL/6J小鼠基因组中采用高保真PCR扩增小鼠CD86基因的启动子,经测序鉴定后,插入pCDNA3.1-EGFP重组质粒。然后分别转染小鼠来源细胞株:RAW264.7、NIH/3T3、P815、SP2/0、EL4细胞,观察各细胞内绿色荧光蛋白的表达。结果显示,小鼠CD86基因启动子的序列与GenBank报道一致;双酶切鉴定证实小鼠CD86启动子序列已经克隆入重组载体;小鼠CD86启动子能调控EGFP在巨噬细胞系RAW264.7细胞中表达,不能调控EGFP在NIH/3T3、P815、SP2/0和EL4非抗原提呈细胞内表达。说明成功构建小鼠CD86基因启动子,且该启动子具有特异性调控目的基因表达的活性。     

高能X线照射对肿瘤细胞表达MICA及NK细胞功能的影响

目的探讨肿瘤细胞接受不同剂量高能X线照射后,细胞表面MICA抗原表达及对NK细胞功能的影响。方法分别取T淋巴细胞株T2、结肠腺癌细胞株LS-174-T及食管鳞癌细胞株ECA-109,经0、4、8、163、2 Gy的剂量照射,16 h过夜培养,给细胞标记MICA的单克隆抗体,分析肿瘤细胞平均荧光密度(MFI的变化。并将外周血单个核细胞与经优化剂量照射的肿瘤细胞按10∶1比例孵育,4 h后利用流式细胞术胞内染色法分析NK细胞释放穿孔素的情况以评价NK细胞的杀伤毒性。结果不同肿瘤细胞株上调MICA表达的最佳放疗剂量不同,而肿瘤细胞上调MICA表达后可增强NK细胞的杀伤毒性。结论适宜的放射剂量促进肿瘤细胞表达MICA抗原而增强机体免疫功能。