人巨细胞病毒PP65_(322～561)片段的原核表达及功能鉴定

目的 构建人巨细胞病毒(HCMV)PP65_(322～561)蛋白片段的原核表达载体PQE30-PP65,并表达蛋白.方法 PCR扩增HCMV PP65第976～1686位核苷酸片段;构建重组表达质粒PQE30-PP65转化M15并表达蛋白;PCR、SDS-PAGE及Weatern blot鉴定重组载体及表达产物;ELISA检测目的蛋白的抗原性.结果构建了PQE30-PP65表达载体,在M15菌株中成功表达PP65_(322～561)蛋白,蛋白浓度达到2.2g/t.并与pp65单克隆抗体及HCMV LgG阳性血清反应良好.结论 成功构建PQE30-PP65表达载体,表达的目的蛋白具有良好的抗原性.     

人巨细胞病毒PP65322-561片段的原核表达及功能鉴定

目的构建人巨细胞病毒（HCMV）PP65,控～矧蛋白片段的原核表达载体PQE30-PP65,并表达蛋白。方法PCR扩增HCMVPP65第976～1686位核苷酸片段;构建重组表达质粒PQE30-PP65转化M15并表达蛋白;PCR、SDS-PAGE及Western blot鉴定重组载体及表达产物;ELISA检测目的蛋白的抗原性。结果构建了PQE30-PP65表达载体,在M15菌株中成功表达PP65勉娟。蛋白,蛋白浓度达到2．2g／L并与pp65单克隆抗体及HCMVIgG阳性血清反应良好。结论成功构建PQE30-PP65表达载体,表达的目的蛋白具有良好的抗原性。     

小剂量环磷酰胺对正常小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞的调节作用

目的比较多次与单次应用小剂量环磷酰胺(CTX)对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量及功能的影响,明确小剂量CTX可否多次用于下调Treg细胞。方法 C57BL/6小鼠32只,随机分为正常对照、单次、两次及三次CTX注射组共4组,各组每10天腹腔注射20 mg/kg CTX或等体积PBS,末次给药后3 d,流式细胞技术测小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比;同时3-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法比较各组脾细胞中T、B细胞增殖功能,中性红吞噬试验比较各组巨噬细胞吞噬功能。结果各实验组小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比显著低于对照组(P<0.05),而各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。各实验组T、B细胞增殖指数及巨噬细胞吞噬功能明显高于对照组(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。应用CTX后Treg细胞数量与T、B细胞增殖功能及巨噬细胞吞噬功能呈线性负相关。结论多次与单次小剂量应用CTX对小鼠Treg细胞数量的下调作用无差异,下调Treg细胞后对免疫细胞的调节功能也无差异,小剂量CTX可多次用于下调正常小鼠Treg细胞。     

中医辨证治疗强直性脊柱炎的临床疗效分析

目的:研究中医辨证方案对于强直性脊柱炎的治疗效果.方法:以我院2016年7月至2017年7月期间风湿免疫科经过治疗的80例强直性脊柱炎案例作为研究主体,并且将其划分成常规组与观察组,每组各有40人,常规组采用强直性脊柱炎常规治疗方案,而观察组则结合病人的不同病症采取有针对性的中医辨证方案.统计最终护理效果并进行分析对比.结果:常规组所采用的常规治疗方案的有效率是65％,观察组的有效率则高达92％,两组的最终护理效果差异十分明显,存在统计学意义(P<0.05).结论:针对强直性脊柱炎病人的临床治疗,中医辨证有着突出的治疗效果,应当在临床治疗中进行应用.     

WT1-235肽体外抗肿瘤效应的研究

目的探索WT1肽体外抗肿瘤效应。方法合成含HLA-A*0201锚定位点的9个氨基酸的WT1-235肽。PCR-SSP法筛选HLA-A*0201健康供者并鉴定细胞株HLA-A基因型别,RT-PCR鉴定靶细胞株WT1表达与否。体外分离HLA-A*0201型别的外周血单个核细胞(PBMCs),培养树突状细胞(DC),负载WT1肽并刺激活化同源淋巴细胞,进行体外CTLs杀伤靶细胞的细胞毒试验。结果荷肽DC活化的CTLs对高表达WT1的HLA-A*0201型别细胞株SW48的杀伤效应高于不表达WT1的HLA-A*0201型别的人T细胞,也高于表达WT1但非HLA-A*0201型别的K562细胞(P<0.05)。结论 WT235-242肽具有体外抗肿瘤效应并受MHC限制。     

超声抗原树突状细胞瘤苗抗肿瘤效应的体外研究

 目的　探讨结肠癌肿瘤超声抗原致敏的树突状细胞（DC）疫苗体外对结肠癌细胞的杀伤作用。方法　分离HLA-A*0201型健康供者的外周血单个核细胞（PBMC）,重组人细胞因子 rhGM-CSF、rh IL-4、rh TNF-α体外诱导DC成熟,负载SW480超声抗原后体外刺激同一供者的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）前体,MTT法检测CTL杀伤SW480（HLA-A*0201阳性）、K562（HLA-A*0201阴性）的细胞毒实验。结果　在效靶比20∶1、10∶1、5∶1、2.5∶1作用时,CTL对SW480的杀伤率分别为51.12 %、46.67 %、52.60 %、40.00 %;对K562的杀伤率分别为29.26 %、31.98 %、39.46 %、31.30 %,证明在各种效靶比作用时,CTL对SW480的作用均强于K562（P＜0.05）。结论　肿瘤超声抗原致敏的DC瘤苗能激发具有特异杀伤功能的CTL,并且体外杀伤靶细胞具有MHC限制性。