人乳头瘤病毒E_7蛋白的研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)的早期基因E_7,编码一个具有生物活性的癌蛋白。E_7白与腺病毒ElA、SV_(40)大T抗原病毒癌蛋白有相似的结构与功能。本文对有关E_7蛋白结构与功能的研究进展进行综述。     

HPV16E7基因克隆及其特异性鉴定

根据已报导的ＨＰＶ１６Ｅ７基因序列，设计了两个寡核苷酸引物，在引物的５’端分别引入了ＥｃｏＲＩ和Ｈｉｎｄ Ⅲ酶切位点，采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增了ＨＰＶ１６Ｅ７基因片段。通过ＥｃｏＲＩ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切位点与ｐＵＣ１８载体连接，重组质粒转化宿主菌ＪＭ１０９，在含Ｘ－ｇａｌ、ＩＰＴＧ的平板上直接筛选，斑点杂交，ＰＣＲ扩增鉴定和酶切分析证明得到了含ＨＰＶ１６Ｅ７完整的编码序列的重组克隆。     

改进的PCR模板制备及DNA回收方法

直接用煮沸的细菌裂解液中的ＤＮＡ作ＰＣＲ模板，扩增效果与用酚／氯仿抽提纯化的质粒ＤＮＡ作模板的结果一致，缩短了实验时间。利用简单材料回收酶切片段，省去了有机溶剂反复抽提和沉淀的步骤，回收率达到９０％，效果很好。     

介绍一种滤纸片快速回收DNA片段的方法

采用置于Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中的滤纸片，快速离心的方法回收ＤＮＡ片段。实验表明，该方法是一种简便、快速、可靠的回收ＤＮＡ片段的方法，回收率高。回收的ＤＮＡ片段可进一步用于基因工程中克隆连接、酶切和探针标记。     

改进的PCR模板制备及DNA回收方法

直接用煮沸的细菌裂解液中的ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板，扩增效果与用酚／氯仿抽提纯化的质粒ＤＮＡ作模板的结果一致，缩短了实验时间，利用简单材料因收酶切片段，省去了有机溶剂反复抽提和沉淀的步骤，回收率达了９０％，效果很好。     

HPV16 E_7基因克隆及其特异性鉴定

根据已报导的ＨＰＶ１６Ｅ_７基因序列，设计了两个寡核苷酸引物，在引物的５′端分别引入了ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切位点，采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增了ＨＰＶ１６Ｅ_７基因片段。通过ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切位点与ｐＵＣ１８载体连接，重组质粒转化宿主菌ＪＭ１０９，在含Ｘ－ｇａｌ、ＩＰＴＧ的平板上直接筛选，斑点杂交，ＰＣＲ扩增鉴定和酶切分析证明得到了含ＨＰＶ１６Ｅ_７完整的编码序列的重组克隆。     

人乳头瘤病毒18型E7蛋白基因的克隆研究

根据人乳头瘤病毒ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８的核苷酸序列，设计扩增其Ｅ７基因的特定引物，并使引物的５′端引入ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄⅢ酶切位点，用聚合酶链反应扩增ＨＰＶ１８Ｅ７片段，通过ｐＵＣ１８质粒载体多聚接头的ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄⅢ双酶切位点与Ｅ７基因片段连接，构建一新的重组体，转化到大肠杆菌ＪＭ１０９，经筛选，快提质粒等鉴定，初步证实获得了ＨＰＶ１８Ｅ７基因的重组体。     

一种简单快速的用于分子克隆的DNA回收方法

一种简单快速的用于分子克隆的ＤＮＡ回收方法苏应斌，莫道君，伍欣星，赵文先（湖北医科大学病毒所分子生物室，武汉４３００７１）分子克隆中用于连接和转化的ＤＮＡ主要来自电泳琼脂糖凝胶中回收纯化的ＤＮＡ片段。已建立了许多回收ＤＮＡ的方法，如：低融点琼脂糖凝胶...