水通道蛋白在胶质细胞的表达及其意义

20世纪80年代,美国学者Peter Agre发现质膜上存在一类介导水快速跨膜转运的膜蛋白,这类膜蛋白被称作水通道蛋白.已有大量研究发现胶质细胞表达的水通道蛋白对神经系统疾病的发生有重要作用.本文综述水通道蛋白在胶质细胞的表达定位及其意义,为中枢和周围神经系统疾病的诊断和治疗提供新的靶点.     

小鼠水通道蛋白1基因shRNA慢病毒载体构建与鉴定

目的 应用RNA干扰技术,构建小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因重组慢病毒载体并鉴定.方法 对小鼠AQP1 mRNA分析,设计合成的单链引物经退火形成双链寡核苷酸序列,连接入经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切线性化的pLKO.1-TRC慢病毒质粒载体中,菌液PCR鉴定并经测序验证.测序正确后与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞,收集病毒上清经高速离心浓缩后感染小鼠小胶质细胞BV-2,Western blot法分析筛选有效shRNA序列.结果 成功退火合成3对发夹shRNA序列并将其克隆到pLKO.1-TRC载体中,构建重组质粒pLKO-AQP1-SH1、2、3,经菌液PCR鉴定和测序验证载体构建成功.Real-time PCR检测发现重组质粒pLKO-AQP1-SH2感染BV-2细胞后AQP1 mRNA表达最低,Western blot结果进一步验证结果的准确性.结论 成功构建出AQP1基因shRNA慢病毒载体.     

小鼠水通道蛋白1基因慢病毒载体构建及其在神经膜细胞中的表达

目的 构建表达小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因的慢病毒载体,体外感染原代培养的C57BL/6小鼠神经膜细胞,观察是否提高AQP1的表达,为进一步研究AQP1与周围神经系统损伤后水肿的关系奠定基础.方法 将小鼠AQP1基因克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆.将鉴定后的重组表达质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQp1与包装质粒psPAX2、pMD共转染293T细胞,制备携带AQP1基因的慢病毒lentivirus-AQP1.体外培养C57BL/6小鼠的神经膜细胞,将lentivirus-AQP1感染神经膜细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测感染后神经膜细胞AQP1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 构建的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1经PCR鉴定和测序正确.慢病毒lentivirus-AQP1感染神经膜细胞后AQP1表达增加(P＜0.05).结论 成功构建了小鼠AQP1基因的慢病毒表达载体,该载体能有效感染神经膜细胞,使AQP1 mRNA和蛋白表达水平增高.     

猪皮肤软组织爆炸伤缺损模型的建立及致伤特点观察

目的 建立实验室条件下爆炸伤致皮肤软组织缺损的动物模型,观察其致伤特点.方法 选取家猪,采用并排瞬发电雷管作为爆炸物,建立爆炸伤皮肤软组织缺损动物模型.致伤后创面显露,分别于6h、3d、5d、7d进行创面大体、细菌学及病理学检测.结果 并排瞬发电雷管于家猪肩胛、臀部冲击波效应基本一致.致伤后软组织损伤严重,创面面积足够,术后炎症加重,肉芽生长缓慢.创面细菌计数逐渐增加,伤后7d达到1×109cfu/g水平.结论 猪软组织爆炸伤缺损模型能真实模拟爆炸伤的致伤效果,致伤面积较大,缺损范围及层次均一,适合作为爆炸伤软组织缺损修复研究的动物模型.     

膝周软组织缺损修复的研究进展

目的总结用于膝周软组织缺损修复的皮瓣、筋膜瓣、肌瓣及肌皮瓣的研究进展,为临床应用提供参考。方法查阅近年国内外有关膝周软组织缺损修复的文献,进行总结分析。结果筋膜皮瓣符合膝周软组织重建需皮瓣薄、柔软而坚韧的要求;肌(皮)瓣可以充填残腔,血供丰富,抗感染能力更强;游离皮瓣是局部或邻位皮瓣无法利用时的一种选择。结论临床应根据膝区不同缺损部位、深度和范围选择合适皮瓣修复软组织缺损,筋膜皮瓣因供区损伤小、重建外形良好,可作为首选。     

敲减水通道蛋白1对小鼠雪旺细胞形态及水转运的影响

目的探讨水通道蛋白1(AQP1)基因表达和雪旺细胞肿胀之间的关系。方法细胞免疫荧光双标法验证小鼠面神经来源的原代雪旺细胞AQP1表达;应用慢病毒RNA干扰技术下调雪旺细胞AQP1表达;AQP1-shRNA感染雪旺细胞后,与CTRL组(scr-shRNA)比较,每天在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,连续6d;细胞容积测定量化AQP1-shRNA细胞与CTRL(scr-shRNA)细胞水含量变化;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测AQP1-shRNA对雪旺细胞凋亡的影响。结果小鼠面神经来源的原代雪旺细胞表达AQP1;构建的小鼠AQP1-shRNA慢病毒载体感染雪旺细胞后,能在mRNA和蛋白水平明显抑制AQP1表达(P0.05);AQP1-shRNA能使雪旺细胞形态皱缩,细胞水含量明显降低(P0.01);AQP1-shRNA细胞较CTRL组细胞增殖活力低(P0.05),但不会引起雪旺细胞明显的凋亡。结论 AQP1是控制雪旺细胞快速水转运的主要因素,抑制AQP1表达可能提供一种临床治疗面神经水肿的新方法。     

负压创面治疗技术早期应用对软组织爆炸伤创面作用的研究

目的动态观察爆炸伤创面内细菌数量及病理改变,探讨负压创面治疗技术（NPWT）早期应用,对于控制软组织爆炸伤创面感染及肉芽生长的作用。方法采用猪爆炸伤软组织缺损模型,3只家猪随机分为一侧NPWT组,对侧为纱布敷料组,每组6个创面：另选取两只家猪形成的6个创面设为暴露组。致伤后分别于6h及第3、5、7天取各组创面中央组织行细菌定量,创面组织培养．HE染色观察肉芽生长情况。结果治疗前各组间细菌数无统计学差异。治疗后各时间点NPWT组细菌计数较纱布组、暴露组数值小。治疗后第3天NPWT组计数达到最高,第5天细菌计数降至感染临界值水平以下。NPWT治疗后创面面积缩小．深度变浅。NPWT组治疗后第3天肉芽组织新生较纱布组多,成纤维细胞、血管内皮细胞染色明显．组织细胞水肿减轻。结论NPWT早期应用能有效抑制爆炸伤创面细菌增殖,促进肉芽生长。     

爆炸性四肢软组织战伤特点及其早期修复的研究进展

爆炸性武器已大量应用于现代战争以及恐怖袭击,造成巨大人员伤亡,而体表软组织往往首先波及。与一般火器伤相比,爆炸伤在致伤机制、致伤特点和救治原则上均有所不同。本文从战场背景下的四肢软组织爆炸伤的特点及其缺损的早期修复方面着眼,简要综述其研究进展。     

兔阑尾黏膜预制尿道行阴茎再造的实验研究

目的 探讨以兔阑尾黏膜预制尿道行阴茎再造的可行性.方法 60只雄性新西兰兔随机分为两组,分别利用阑尾黏膜和皮片预制尿道,术后3个月行阴茎再造术.观察阑尾黏膜预制尿道后2周,1、2、3个月及阴茎再造术后1、3个月时尿道的组织学变化;对比两组阴茎再造术后1、3个月阴茎大体形态变化和逆行尿道造影改变;对比两组阴茎再造术后3个月时,尿道并发症发生率的差异.结果 阑尾黏膜预制尿道移植后,单层柱状上皮经历了早期脱落、再生,到后期逐渐萎缩凋亡,并被复层鳞状上皮逐渐移行、化生及取代的过程;阴茎再造术后 1个月,尿道已无单层柱状上皮存留,均被覆复层鳞状上皮,但上皮较薄,而再造术后3个月时,尿道复层鳞状上皮进一步增生增厚;两组再造阴茎大体形态无明显差异;逆行尿道造影显示,两组尿道早期吻合口处均存在管腔狭窄,逐渐趋于减轻;两组尿道狭窄及尿瘘并发症发生率差异具有统计学意义,阑尾黏膜组无尿路结石的发生,而皮片组由于毛发生长,6例出现毛石症,差异具有统计学意义（P ＜0.05）.结论利用阑尾黏膜预制尿道行阴茎再造术,方法可行;为避免尿道狭窄并发症的发生,宜根据尿道内上皮化生程度,调整合适的尿道预制时间.