人血小板生成素在CHO细胞中的稳定表达及其产物鉴定

目前，血小板生成素（ＴＰＯ）的基因工程研究是继促红细胞生成素（ＥＰＯ）之后的又一个热点。由于对ＴＰＯ结构与功能的关系了解不够，其基因工程方面的研究在表达系统的选择和分子结构的设计上均存在很大的盲目性。针对这一问题，作者欲对ＴＰＯ的糖基化程度与其生物学...     

血小板生成素糖基化与其体内生物学活性关系的研究

为探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其体内生物学活性的关系，给血小板缺乏症小鼠模型腹腔分别注射相同活性单位酵母系统表达的人ＴＰＯ成熟肽或大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ－端结构域蛋白，连续给药５ｄ，每天一次，末次给药后３ｄ，比较两种ＴＰＯ组动物外周血血小板数量、骨髓巨核细胞培养单位（ＣＦＵ－Ｍｅｇ）、骨髓有核细胞ＤＮＡ含量。结果高、中、低剂量的ＴＰＯ成熟肽组动物的血小板数、巨核细胞集落数和骨髓ＤＮＡ含量均明显高于ＴＰＯＮ－端结构域蛋白的相应组（Ｐ＜０．０１）。显示酵母系统表达的ＴＰＯ成熟肽比大肠杆菌表达的ＴＰＯＮ－端结构域有明显的生物学活性，这可能与它们的糖基化程度及半衰期有关。     

人B细胞活化相关基因BC-1514全长cDNA的克隆与原核表达

目的 克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达。方法 采用差异显示反转录PCR（DDRT-PCR）技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析。差异显示的片段经过Northern杂交验证后,作为探针进行入活化B细胞cDNA文库的筛选,将所获得的阳性克隆的编码区经PCR扩增后克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,重组质粒经酶切,测序鉴定后转化大肠杆菌BL-21,以IPTG诱导表达融合蛋白。结果 以在活化B细胞高表达的EST32为探针,经3轮筛选人活化B细胞文库获得一个新的全长为1514bp的cDNA克隆（命名为BC-1514）,重组的BC-1514蛋白可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达,其表达量约占细菌总蛋白量的14.3%左右,BC-1514cDNA的GenBank的登录号为AF304442。结论 获得了1条新的与B细胞活化相关的cDNA克隆并在E.coliBL-21中得到了有效表达。