β-地中海贫血基因治疗研究——Ⅰ.以逆转录病毒作载体将人β-珠蛋白基因转移至Friend细胞

用重组人β-珠蛋白基因的逆转录病毒载体转染单向性的ψ-2包装细胞系,继而感染双向性的PA317包装细胞系,分离到能产生重组逆转录病毒载体的细胞系PIWβ,其分泌的重组载体滴度达1.1×10~5CFU/ml。利用这种缺失性病毒粒子,将人β-珠蛋白基因高效地转移到Friend细胞,Southern印迹杂交结果证实,人β-珠蛋白基因可以完整、稳定地整合到靶细胞的基因组上。以上结果为人β-地中海贫血的基因治疗研究提供了有用的参考途径。     

β—地中海贫血基因治疗研究：I.以逆转录病毒作载体将人...

We used a replication-defective retrovirus vector containing the human beta-globin gene to transfect the ecotropic packaging cell line psi-2, and then harvested the virus supernatant to infect the amphotropic packaging cell line PA317. As a result, a recombinant vector producing cell line (PIW beta) with a titer of 1.1 x 10(5) CFU/ml was isolated. By infecting Friend cells with this high titer virus vector, high efficiency gene transfer was achieved. Southern blot hybridization analysis indicated that the intact human beta-globin gene was stably integrated into the genome of the target cells. Our results provide a useful reference for further studies of gene therapy of beta-thalassemia.     

转基因动物

转基因动物(transgenic animals)是指那些在其基因组内稳定地整合进以实验方法导入的外源基因、并能遗传给后代的一类动物。自从1979年Mintz等将SV40病毒DNA导入小鼠早期胚胎的囊胚腔,得到了第一个承载有人工导入的外源基因的嵌合体小鼠以来,在十多年的时间里,转基因研究渗透到了生物学、医学、畜牧学等学科的广泛领域,建立了大量的转基因动物模型,为发育中基     

包装细胞系及其在基因治疗研究中的应用

以逆转录病毒作载体的基因转移系统是基因治疗最基本的手段之一包装细胞系的构建是这一系统的重大突破它的主要特性是能将重组逆转录病毒载体包装成具一次感染性的缺失性病毒粒子,以此感染靶细胞,即能将外源基因稳定地整合到靶细胞的基因组上。通过改良,得到了能产生具广泛宿主范围的重组病毒的包装细胞系,并杜绝了辅助病毒的产生。以重组逆转录病毒载体-包装细胞系这一系统已建立了很多体外以至整体动物内基因转移及表达的模型,有力地促进了基因治疗研究的发展。     

基因打靶

基因打靶(gene targetting)是最近几年发展起来的一项重大生物技术。所谓基因打靶,是指利用基因转移方法,将外源DNA序列导入靶细胞后,通过外源DNA序列与靶细胞内染色体上同源DNA序列间的重组,将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,或对某一预先确定的靶位点进行定点突变的技术。基因打靶技术与转基因技术一样,为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究手段。