研究生免疫学实验技术教学方法及教学内容的选择

免疫实验技术课程作为一门研究生选修课,在教学过程中应对教学形式、教学方法和教学内容进行合理的选择,才能在有限的教时内达到好的效果.教学内容的选择应考虑技术性、连贯性、可操作性、实用性等因素.教学可以选择理论和实践相结合的方法.学习技术不但要学会操作,还要掌握原理、特点、应用;更重要的是培训学生思考问题、分析问题、解决问题的能力;注重培养学生严谨的科研工作作风、实事求是的科学态度及勇于开拓、勇于创新的思维能力.     

β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ在CD4+TH细胞中的表达及对其黏附能力的影响

目的研究β-1，4-半乳糖基转移酶I（β-1，4-galactosyltransferase I，β-1，4-GalT I）在CD4^＋TH中的表达与定位以及β-1，4-GalT I对CD4^＋ TH细胞黏附能力的影响。方法采用免疫磁珠阳性分选法分离纯化CD4^＋ TH细胞，通过RT-PCR、荧光免疫细胞化学法和激光共聚焦技术鉴定CD4^＋ TH细胞中β-1，4-GaIT I的表达与定位；分别用rhIL-2、rhIL-12、rhIL-4等细胞因子组合诱导CD4^＋ TH细胞活化分化，通过半定量RT-PCR、FCM检测CD4^＋ TH细胞中β-1，4-GaIT I的表达变化，运用层黏连蛋白结合实验比较CD4^＋ TH细胞黏附能力的改变；用α-乳清蛋白干扰CD4^＋ TH细胞表面β-1，4-GaIT I的活性及底物特异性，用层黏连蛋白结合实验分析其对CD4^＋ TH细胞黏附能力的影响。结果CD4^＋ TH细胞表面和细胞浆内表达长型和短型β-1，4-GalT I；rhIL-2活化的CD4^＋ TH细胞长型β-1，4-GaIT I mRNA水平及细胞膜表面β-1，4-GaIT I表达水平、细胞黏附能力均高于未经活化的CD4^＋ TH细胞，rhIL-2＋rhIL-12诱导培养的CD4^＋ TH细胞增强更明显；CD4^＋ TH细胞长型β-1，4-GaIT I mRNA水平及细胞膜表面β-1，4-GaIT I表达水平均与CD4^＋ TH细胞黏附能力呈正相关；α-乳清蛋白干扰后CD4^＋ TH细胞黏附能力降低。结论β-1，4-GalT I在CD4^＋ TH细胞中表达，且与细胞黏附能力密切相关，提示β-1，4-GalT I可能在CD4^＋ TH细胞的黏附过程中发挥重要作用。     

原油蒸汽吸入对大鼠氨基酸代谢的影响

实验研究了大鼠吸入原油蒸汽每天３ｇ／ｍ３·８ｈ３０（亚急性染毒），１５ｇ／ｍ３·１２ｈ（急性染毒１组），３０ｇ／ｍ３·１２ｈ（急性染毒Ⅱ组）后血浆与尿中游离氨基酸的水平，发现急性染毒Ⅰ、Ⅱ组大鼠血浆与尿中各种游离氨基酸含量均无明显变化。亚急性染毒组大鼠尿中各种游离氨基酸含量无显著变化，而血浆中频氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及甘氨酸明显降低（Ｐ＜０．０５）。     

高脂血症家兔心肌、血管壁受体相关蛋白的表达研究

目的：探讨受体相关蛋白(RAP)与脂代谢的关系。方法：制备实验性家兔高脂血症动物模型，运用分子生物学技术克隆PAP基因片段，制备GST-PAP融合蛋白，用单克隆技术制备抗PAP单克隆抗体rapF2，用Westem-Blot方法及免疫组化法观察高脂血症家兔心肌，血管壁中PAP的表达及分布。结果：与对照组相比，高脂血症组心肌、血管壁中PAP表达增加，且主要分布于心脏的外膜、冠状动脉内壁与外周血管壁的内、外膜，并在67～94KD间出现特异表达带。结论：血液中过量的脂质及脂质代谢的紊乱可引起血管壁的病理改变并伴随PAP表达增加，PAP表达可能与脂质的代谢过程密切相关。     

高胆固醇血症肾皮质中RAP的表达

目的：探讨受体相关蛋白的（RAP）在肾皮质的表达与脂代谢的关系。方法：应用编码319氨基酸的RAP基因片段克隆表达的融合蛋白，制备针对该受体相关蛋白的RAP抗体，用免疫印迹杂交方法及免疫组化法分析家兔高胆固醇血症模型的肾皮质中RAP的表达情况，结果：模型组与对照组在44KDa处均有RAP杂交带，RAP在高胆固醇血症模型肾皮质中的表达量明显高于对照组，免疫组化显示RAP主要分布于肾小球毛细血管基底膜，肾小管周围间质内。结论：RAP可能在脂代谢过程中发挥一定的作用。     

尾静脉高压注射CⅡTA siRNA对小鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用

目的 将MHCⅡ类反式作用因子(CⅡTA) siRNA用于胶原诱导的小鼠关节炎模型中,观察是否具有治疗效果.方法 将雄性DBA/1小鼠随机分为胶原诱导性关节炎(CIA)模型组、CⅡTA siRNA组(siCⅡTA组)、control siRNA组(siCT组)、正常组.再次免疫后4周观察小鼠发病情况,检测小鼠足爪的肿胀度,病理切片观察炎症变化,MTT检测脾淋巴细胞对CⅡ胶原的增殖反应,实时荧光定量PCR检测小鼠脾细胞IFN-γ、IL-4 mRNA表达水平,ELISA检测小鼠血清中IFN-γ、IL-4、IL-17的含量.结果 siCⅡTA组关节炎评分、脾淋巴细胞对Ⅱ型胶原的增殖反应低于模型组和siCT组;siCⅡTA组IFN-γ、IL-17水平低于模型组和siCT组,但IL-4水平高于模型组和siCT组.结论 尾静脉高压注射CⅡTAsiRNA对CIA具有治疗作用.     

Heymann肾炎致病原受体相关蛋白羧基端多肽表达的研究

本研究中，用ＰＣＲ方法扩增了受体相关蛋白基因第６３３～９５７碱基ｃＤＮＡ片段。将编码成熟分子量为４４×１０３受体相关蛋白和羧基端１０８氨基酸多肽的ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１内，限制性图谱分析测定了插入子的方向并用ＤＮＡ序列分析加以证实。带有质粒ｐＧＥＸ－Ｒ９３（包含完全ＲＡＰｃＤＮＡ９５７碱基）的重组菌过度表达了分子量为６５×１０３融合蛋白，其含量占总蛋白的３９．４％。带有质粒ｐＧＥＸ－Ｒ３５（包含ＲＡＰｃＤＮＡ３２４碱基）表达了４０×１０３的融合蛋白，蛋白含量３２．２％。通过谷胱甘肽亲和层析柱，从细菌溶解物中纯化了融合蛋白，每升培养物能纯化到１０～２０ｍｇ的蛋白，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明抗Ｒ９３和抗Ｒ３５两种抗血清特异性结合到大鼠肾皮质微绒毛提取物中的４０×１０３的带。间接免疫荧光显示抗Ｒ９３和抗Ｒ３５两种抗体标记肾近曲小管刷状缘抗原。文中对表达的受体相关蛋白的意义和其抗原性进行了讨论。     

Heymann肾炎致病原受体相关蛋白在大肠杆菌中的表达

为研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎致病原的病理表型和免疫复合物形成机理，应用ＤＮＡ重组技术，将Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）致病原受体相关蛋白（ＲＡＰ）的ｃＤＮＡ克隆到表达质粒ｐＧＥＸ中，构建重组表达质粒ｐＧＥＸ－Ｒ９３，经限制性内切酶图谱分析，ＤＮＡ测序，鉴定插入子ＲＡＰ－ｃＤＮＡ正确克隆到ｐＧＥＸ表达框架后，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经ＩＰＴＧ诱导，高效表达了谷胱甘肽巯基转移酶－受体相关蛋白（ＧＳＴ－ＲＡＰ）融合蛋白，蛋白产量占大肠杆菌总蛋白量的３９．４％。经ＧＳＴ－Ｓｅｐｈｏｓｅ４Ｂ亲和层析得到高度纯化的ＧＳＴ－ＲＡＰ。免疫印迹分析证明，针对ＧＳＴ－ＲＡＰ的抗血清能特异地识别肾皮质天然抗原４４０００α蛋白，免疫组化分析显示ＧＳＴ－ＲＡＰ抗血清特异性识别大鼠肾近曲小管刷状缘抗原。     

免疫学实验课教学改革探讨

加强实验课与理论课的联系,充分体现实验课的重要地位;加强学生实验课的考核,并极力改善实验条件,增加实验资本投入,加强学生技能训练与培养的全面性。实验课的内容整体性安排要更合理,以克服所存在的难点和缺陷,同时必须加强青年教师实验岗位培训,提高自身实验技能。