Decorin基因转染对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探讨核心蛋白聚糖(DCN)对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的影响及可能的机制。方法:构建裸鼠胃癌移植瘤模型,将重组质粒pEGFP-N1-DCN注入肿瘤中央及基底部,以空质粒组和生理盐水组作为对照,测量肿瘤体积和质量的变化,RT-PCR及Western blot法检测DCN的表达,Western blot法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,免疫组织化学染色方法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:裸鼠胃癌移植瘤模型构建成功,与对照组比较,重组质粒组肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积和质量明显变小(P<0.05);RT-PCR显示重组质粒组DCN表达增强(P<0.05),Western blot结果显示重组质粒组有融合蛋白的表达,重组质粒组TGF-β1及MMP-9蛋白表达均降低(P<0.05);免疫组化显示重组质粒组VEGF表达降低(P<0.05)。结论:DCN基因可以抑制裸鼠移植瘤生长,其机制可能与转化生长因子-β1及基质金属蛋白酶-9蛋白的表达降低和肿瘤新生血管形成抑制有关。     

重组质粒pEGFP-N1-NPRL2对人胃癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体对SGC-7901胃癌细胞体外增殖﹑细胞周期、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法:构建pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体,并进行酶切及测序鉴定。脂质体介导转染入SGC-7901胃癌细胞,应用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot法检测NPRL2的基因及蛋白水平情况,CCK8法检测细胞增殖的变化,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率的变化,Transwell实验检测NPRL2对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:成功构建了pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体。重组质粒转染SGC-7901细胞后,通过荧光显微镜观察到绿色荧光的表达,RT-PCR和Westernblot法检测到NPRL2 mRNA及蛋白的表达,CCK8法检测发现NPRL2能够明显抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05),细胞周期分析显示NPRL2使细胞停在G0～G1期(P<0.05),细胞凋亡结果显示NPRL2能抑制细胞凋亡(P<0.05),Transwell侵袭和迁移实验显示NPRL2使细胞侵袭迁移能力均降低(P<0.05)。结论:NPRL2可抑制肿瘤细胞的增殖、周期、侵袭及迁移,并促进凋亡。     

shRNA抑制Nanog基因的表达对胃癌细胞SGC-7901分子生物学行为的影响

目的:利用RNA干扰技术构建并筛选出对Nanog基因有抑制作用的重组质粒pshRNA-Nanog,转染入胃癌细胞SGC-7901中,检测其对Nanog表达的影响及其对胃癌细胞SGC-7901的增殖、周期、凋亡以及迁移的影响。方法:构建出针对人Nanog基因构建出的干扰质粒pshRNA-Nanog,在脂质体的介导下将其转染胃癌细胞SGC-7901,通过荧光显微镜,RT-PCR和Western blot法检测其表达,筛选出抑制率最高的一组;将筛选出的转染效率最高的一组pshRNA-Nanog重组质粒转染胃癌细胞SGC-7901中,通过CCK-8检测其胃癌细胞SGC-7901增殖情况,流式细胞仪分析SGC-7901周期变化和凋亡情况,Transwell迁移实验验证Nanog对SGC-7901的迁移能力以及侵袭实验验证Nanog对SGC-7901侵袭能力的影响。结果:成功构建并筛选出了对胃癌细胞SGC-7901干扰效果最明显的一组重组质粒;细胞的增殖受到抑制,胃癌细胞侵袭能力及迁移能力减弱,细胞周期停滞在S期,细胞的凋亡明显增加。结论:Nanog基因与胃癌细胞的增殖能力、周期及凋亡、迁移和侵袭能力有密切的关系。