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乳头瘤病毒在生殖道黏膜增殖传播 ,与妇女生殖道黏膜检测不到HPVIgA抗体有关 ,因此诱导生殖道黏膜HPV特异性抗体对于防治HPV性传播性疾病具有重要的价值。本研究采用细菌内源性诱导启动子nirB ,以霍乱毒素CTA2B亚单位为黏膜免疫佐剂 ,构建HPV16重组减毒沙门菌疫苗pNir 16L1E7CTA2B ,研究其诱导黏膜免疫的能力。减毒沙门菌S .SL32 6 1为一种aroA基因突变株。在携带霍乱毒素CTA2B黏膜免疫佐剂基因载体pET CTA2B的基础上 ,将pUC 16L1E7中的HPV16L1E7经PCR和T A克隆技术插入pET CTA2B ,获得pET 16L1E7CTA2B。确定启… 相似文献
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RP-HPLC测定桂龙咳喘宁胶囊中肉桂酸的含量 总被引:5,自引:1,他引:5
桂龙咳喘宁胶囊由桂枝、龙骨、半夏、黄连等药材加工制成,属于国家中药保护品种[1]。止咳化痰、降气平喘等功能。中药胶囊中制剂中桂枝为君药,其主要成分肉桂酸(cinnamicacid)具有抗菌、利胆、消炎、升白细胞等药理作用。为制剂质量标准,保证安全有效,本实验采用RP HPLC测定制剂中的肉桂酸含量。结果表明,本法简便、快速、灵敏、准确,可用于本品质量控制方法之一。1 仪器与试药日本岛津公司LC -6A型高效液相色谱仪,SPD -6AV型 相似文献
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目的:首次从附子中分得腺苷,并应用高效液相色谱法建立附子不同炮制品、川乌、参附注射液中腺苷含量的测定方法。方法:采用Diamonsil Cl8柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-磷酸盐缓冲液(15:85);检测波长:260 nm;流速:1.0 mL/min。结果:腺苷在0.062~0.217μg范围内线性关系良好,R=0.9997,平均回收率为99.9%,RSD=2.41%。结论:本方法可靠、准确、简便,为评价附子不同炮制品、川乌、参附注射液的质量提供了科学依据。 相似文献
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QuEChERS法结合气相色谱-串联质谱法测定贝母类中药中53种农药残留 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立基于QuEChERS法结合气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)对贝母类中药中53种农药残留量的快速检测方法,并应用于193批样品筛查。方法根据调研选择禁限用及常用农药作为检测指标。采用QuEChERS法对样品进行前处理,在气相色谱-串联质谱多反应监测(MRM)模式下进行测定,以3个添加水平测定样品的回收率和RSD。结果 53种农药在一定含量范围内线性关系良好,r均大于0.997 8;在1倍LOD(Limit of Detection)、2倍LOD、10倍LOD 3个添加浓度水平进行回收率试验中,86.8%的农药在60%~140%,RSD均小于15%;各农药检出限均小于0.01 mg/kg。193批贝母类中药种共检出14种农药,91批样品有检出,检出率为47.2%,仅有1批超出即将执行的《中国药典》2020年版限度规定。结论该方法检测指标具有一定针对性,且操作简便快速、灵敏可靠,适用于贝母类中药中农药残留的筛查测定。对于贝母类中药的生产种植和流通监管具有一定的参考意义。 相似文献
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含变形链球菌PAcA基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PAcA的构建与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :构建含有免疫刺激序列、可防止变形链球菌在牙面粘附的DNA疫苗。方法 :利用PCR技术由质粒pPAcA CTA2 B扩增编码PAcA的DNA片段 ;通过T A克隆技术将目的DNA片段克隆于载体pMD1 8 T ,鉴定插入方向后 ,将目的DNA从载体上释放 ,再克隆于含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出用作防龋疫苗的真核表达质粒pcDNA3 .1 PAcA。结果 :通过对重组质粒pcDNA3 .1 PAcA进行酶切图谱和DNA序列测定分析 ,证明真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA构建成功、阅读框架正确。结论 :利用T A克隆等技术可成功将编码PAcA的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA。 相似文献
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携带双启动子DNA疫苗载体的减毒沙门菌在体内定植及动态变化 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨双启动子DNA疫苗载体在减毒沙门菌中的稳定性和重组减毒沙门菌在小鼠体内的定植及动态变化。方法:将人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体pCN-16L1E7转化减毒沙门菌S-SL3261,经口服、鼻饲和皮肤途径免疫小鼠,在免疫后的第3、4、5、6周取小鼠粘膜相关淋巴组织,电镜观察细菌在组织中的定植;组织匀浆,细菌培养计数确定细菌的增殖;从细菌中提取质粒酶切鉴定以确定质粒的稳定性。结果:重组减毒沙门菌S-SL3261能在小鼠脾脏、肝脏和粘膜相关淋巴组织中定植,电镜可检测到多个细菌定植灶;重组减毒沙门菌可有效进入机体细胞并有限增殖达6周,在第4~5周菌落数量达到高峰,然后逐渐减少以至最后被清除。pCN-16L1E7可在减毒沙门菌中稳定存在,载体的产量和酶切图谱没有明显变化。结论:双启动子DNA疫苗载体pCN-16L1E7与减毒沙门菌有较好的相容性,能够在小鼠体内定植及有限增殖。口服、鼻饲和皮肤粘膜接种途径均可有效地将减毒沙门菌携带的DNA疫苗载体导入粘膜相关淋巴组织。 相似文献
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减毒沙门氏细菌为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗。方法 :设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir ,含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件 ,插入pTriEx真核启动子CMVIE下游 ,构建pCMVnir双启动子载体。将人乳头瘤病毒 16型L1L7,融合基因 ,插入pCMVnir,制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析检测Nir启动子的活性。结果 :经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析 ,成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质。结论 :成功构建了一种与胞内寄生细菌(减毒沙门氏细菌 )匹配的双启动子DNA疫苗新型载体 ,并构建了HPV16pCMVnirL1E7新型DNA疫苗 相似文献
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目的:分析法半夏、姜半夏、清半夏的近红外光谱,建立半夏不同炮制品的快速鉴别法.方法:采集半夏炮制品近红外光谱信息,结合二阶导数光谱、化学计量学技术,探究不同半夏炮制品的光谱差异及建立快速鉴别模型.结果:在近红外光谱中,半夏炮制品在8336.91、6861.57、6311.60、5861.42、5668.34、5162.24、4772.29、4330.16 cm-1处均有较强的振动吸收,表明半夏炮制品的主要化学组分较为相似.二阶导数光谱结合聚类、偏最小二乘法判别分析和K最近邻分类算法分析发现,半夏炮制品之间具有特征性差异.讨论:近红外光谱能快速有效地用于鉴别半夏炮制品,为半夏炮制工艺、质量评价提供科学的参考依据. 相似文献