人胰岛素样生长因子1基因转染脂肪源性干细胞的效应

背景：人胰岛素样生长因子1基因对脂肪源性干细胞的增殖和分化也可能会产生有效作用。目的：验证人胰岛素样生长因子1基因转染对体外培养的脂肪源性干细胞的效应。方法：构建含人胰岛素样生长因子1基因的双顺反子真核表达载体plRES2-EGFP-hlGF-1,利用阳离子脂质体Lipofectamine2000介导转染体外培养的人脂肪源性干细胞。观察基因转染后细胞增殖及形态的变化,倒置荧光显微镜观测标记基因增强绿色荧光蛋白的表达并计算转染效率,酶联免疫吸附试验检测培养上清中人胰岛素样生长因子1的浓度,免疫组织化学染色及RT-PCR检测人胰岛素样生长因子1的表达,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果与结论：测序及酶切证实真核表达载体plRES2-EGFP-hlGF-1构建正确。体外培养的脂肪源性干细胞为多种形态并存,转染后6h检测到有EGFP的表达,至60h达到高峰,转染效率为（16±3）％。细胞上清中人胰岛素样生长因子1的浓度在60h达到22．65υg／L。免疫组织化学染色及RT-PCR均检测到人胰岛素样生长因子1的表达。转染后的细胞分裂增殖加快,细胞群体倍增时间缩短,S期细胞比例增多。证实人胰岛素样生长因子1基因可有效转染脂肪源性干细胞并表达人胰岛素样生长因子1蛋白质,同时可促进细胞增殖。     

人软骨细胞培养上清诱导脐血间充质干细胞向软骨细胞分化

背景：人脐血间充质干细胞作为软骨缺损修复的种子细胞日益受到关注,现有常用诱导方法无论是应用诱导培养基还是诱导因子,因其价格昂贵、用量大等因素限制了实际应用。
　　目的：验证人软骨细胞培养上清诱导人脐血间充质干细胞向软骨细胞分化的可行性。
　　方法：利用密度梯度离心法和贴壁培养法分离新生儿脐血,获取并培养人脐血间充质干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原。切取股骨头置换或全髋关节置换患者透明软骨组织,体外分离培养软骨细胞,利用其培养上清培养人脐血间充质干细胞,培养2周后观察细胞表型外观变化,免疫组化染色检测Ⅱ型胶原表达结果。
　　结果与结论：密度梯度离心法与贴壁培养法可以分离获取人脐血间充质干细胞,流式细胞仪鉴定表面标记CD90,CD105高表达,不表达CD34,CD45。软骨细胞培养上清诱导2周后,人脐血间充质干细胞向多角形、圆形转变,Ⅱ型胶原免疫组化检测表达阳性。提示软骨细胞培养上清可诱导人脐血间充质干细胞表达Ⅱ型胶原,向软骨细胞分化。     

人胰岛素样生长因子Ⅰ基因增强组织工程修复全层半月板缺损

目的 建立全层无血运区半月板缺损模型,观察人胰岛素样生长因子Ⅰ (human insulin-like growth factor Ⅰ,hIGF-Ⅰ)基因修饰骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)复合可注射藻酸钙凝胶修复半月板缺损的效果. 方法 制造成年山羊半月板前角无血运区全层缺损模型.实验分为四组,即基因增强组织工程(gene-enhanced tissue engineering,GETE)组(GETE组):用hIGF-Ⅰ基因转染的BMSCs复合可注射藻酸钙凝胶修复半月板缺损；BMSCs组:用BMSCs复合藻酸钙凝胶修复缺损；空载体组:用藻酸钙凝胶空载体修复缺损；对照组:缺损旷置,不做任何修复.术后4,8,16周时相点行大体观察；光镜、电镜观察修复组织变化；测定修复组织中蛋白聚糖含量. 结果 GETE组修复半月板缺损在4～ 16周效果逐渐改善,缺损完全被修复组织填充,色白质韧,结合紧密,与正常半月板组织相似,大体观察优于其他各组；光镜下可见细胞随凝胶纤维排列分布,载体纤维间隙大多为细胞分泌基质所充填,细胞排列密集,基质分布均匀；扫描电镜观察到纤维排列规整紧密,纤维间缝隙为致密的细胞外基质填充；修复组织中蛋白聚糖含量较高,但与正常半月板仍有差异. 结论 转染hIGF-Ⅰ基因的BMSCs复合可注射藻酸钙凝胶可改善全层半月板缺损的修复效果.     

多孔涂层钽金属棒系统治疗成人股骨头缺血性坏死

背景:多孔涂层钽金属棒系统是专一应用于股骨头缺血性坏死的新型内植物系统,其良好的生物力学特性可为塌陷前股骨头提供必要的软骨下骨支撑,同时具有较好的生物相容性,并可采用微创方式置入,有广阔的应用前景.目的:评价多孔涂层钽金属棒系统治疗成人股骨头缺血性坏死的效果和应用价值.方法:自2008-05/2010-06对22例成人股骨头缺血性坏死患者施行多孔涂层钽金属棒系统固定治疗.其中男17例,女5例,平均年龄39.5岁.病变分期中Ficat Ⅰ期3例,Ficat Ⅱ期19例.单侧17例,双侧5例.置入前髋关节症状以疼痛和跛行为主,Harris评分平均52.5分.结果与结论:置入后随访2-25个月.患者切口均一期愈合,无感染、内植物松动等并发症发生.在随访期间内 X射线检查未发现明显股骨头塌陷及囊变区扩大等病变进展迹象,患者疼痛、跛行等症状缓解明显.终末随访时Harris评分为85.5分,与置入前相比差异有显著性意义.主观满意度:优17例,良3例,中2例,总体优良率91%.结果可见多孔涂层钽金属棒系统置入治疗Ficat Ⅰ、Ⅱ期成人股骨头缺血性坏死可取得良好的早、中期效果.     

多孔涂层钽金属棒系统治疗成人股骨头缺血性坏死

背景：多孔涂层钽金属棒系统是专一应用于股骨头缺血性坏死的新型内植物系统,其良好的生物力学特性可为塌陷前股骨头提供必要的软骨下骨支撑,同时具有较好的生物相容性,并可采用微创方式置入,有广阔的应用前景。 目的：评价多孔涂层钽金属棒系统治疗成人股骨头缺血性坏死的效果和应用价值。 方法：自2008-05/2010-06对22例成人股骨头缺血性坏死患者施行多孔涂层钽金属棒系统固定治疗。其中男17例,女5例,平均年龄39.5岁。病变分期中Ficat Ⅰ期3例,Ficat Ⅱ期19例。单侧17例,双侧5例。置入前髋关节症状以疼痛和跛行为主,Harris评分平均52.5分。 结果与结论：置入后随访2-25个月。患者切口均一期愈合,无感染、内植物松动等并发症发生。在随访期间内X射线检查未发现明显股骨头塌陷及囊变区扩大等病变进展迹象,患者疼痛、跛行等症状缓解明显。终末随访时Harris评分为85.5分,与置入前相比差异有显著性意义。主观满意度：优17例,良3例,中2例,总体优良率91%。结果可见多孔涂层钽金属棒系统置入治疗Ficat Ⅰ、Ⅱ期成人股骨头缺血性坏死可取得良好的早、中期效果。     

人胰岛素样生长因子1基因转染脂肪源性干细胞的效应

背景：人胰岛素样生长因子1基因对脂肪源性干细胞的增殖和分化也可能会产生有效作用。 目的：验证人胰岛素样生长因子1基因转染对体外培养的脂肪源性干细胞的效应。 方法：构建含人胰岛素样生长因子1基因的双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,利用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导转染体外培养的人脂肪源性干细胞。观察基因转染后细胞增殖及形态的变化,倒置荧光显微镜观测标记基因增强绿色荧光蛋白的表达并计算转染效率,酶联免疫吸附试验检测培养上清中人胰岛素样生长因子1的浓度,免疫组织化学染色及RT-PCR检测人胰岛素样生长因子1的表达,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。 结果与结论：测序及酶切证实真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1构建正确。体外培养的脂肪源性干细胞为多种形态并存,转染后6 h检测到有EGFP的表达,至60 h达到高峰,转染效率为(16±3)%。细胞上清中人胰岛素样生长因子1的浓度在60 h达到22.65 μg/L。免疫组织化学染色及RT-PCR均检测到人胰岛素样生长因子1的表达。转染后的细胞分裂增殖加快,细胞群体倍增时间缩短,S期细胞比例增多。证实人胰岛素样生长因子1基因可有效转染脂肪源性干细胞并表达人胰岛素样生长因子1蛋白质,同时可促进细胞增殖。     

人软骨细胞培养上清诱导脐血间充质干细胞向软骨细胞分化

背景：人脐血间充质干细胞作为软骨缺损修复的种子细胞日益受到关注,现有常用诱导方法无论是应用诱导培养基还是诱导因子,因其价格昂贵、用量大等因素限制了实际应用。 目的：验证人软骨细胞培养上清诱导人脐血间充质干细胞向软骨细胞分化的可行性。 方法：利用密度梯度离心法和贴壁培养法分离新生儿脐血,获取并培养人脐血间充质干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原。切取股骨头置换或全髋关节置换患者透明软骨组织,体外分离培养软骨细胞,利用其培养上清培养人脐血间充质干细胞,培养2周后观察细胞表型外观变化,免疫组化染色检测Ⅱ型胶原表达结果。 结果与结论：密度梯度离心法与贴壁培养法可以分离获取人脐血间充质干细胞,流式细胞仪鉴定表面标记CD90,CD105高表达,不表达CD34,CD45。软骨细胞培养上清诱导2周后,人脐血间充质干细胞向多角形、圆形转变,Ⅱ型胶原免疫组化检测表达阳性。提示软骨细胞培养上清可诱导人脐血间充质干细胞表达Ⅱ型胶原,向软骨细胞分化。