桑辛素对乳头状甲状腺癌TPC-1细胞凋亡的影响

目的 探讨桑辛素对乳头状甲状腺癌(PTC)细胞系TPC-1细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L)桑辛素处理TPC-1细胞，MTT检测细胞增殖活性。采用不同浓度桑辛素或联合N-乙酰-L-半胱氨酸(N-Acetyl-l-cysteine, NAC)处理TPC-1细胞24 h,分为0μmol/L桑辛素组、5μmol/L桑辛素组、10μmol/L桑辛素组、20μmol/L桑辛素组和20μmol/L桑辛素+5 mmol/L NAC组。Hoechst33258染色法观察细胞核形态变化；Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡水平；DCFH-DA染色法检测细胞内ROS水平；Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved-caspase-3及p38MAPK/p53轴相关蛋白p-p38MAPK(Thr180/Thr182)、p38MAPK、MDM2、p53和PUMA等表达水平。结果 不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L)桑辛素处理后，TPC-1细胞增殖活性逐渐降低，并且随着药物...     

齐墩果酸通过抑制自噬调节变应性鼻炎中的Treg/Th17细胞失衡CSCD

目的探讨齐墩果酸对变应性鼻炎(AR)中调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)/辅助性T细胞17(helper T cells 17,Th17)的调节作用及潜在机制。方法收集AR患者鼻黏膜组织及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。饲养BALB/c小鼠。PBMC用于建立AR细胞模型,BALB/c小鼠用于建立AR动物模型。对于AR细胞使用150μg/ml的齐墩果酸进行治疗。对于AR小鼠使用低剂量(L)-齐墩果酸(50 mg/kg)、高剂量(H)-齐墩果酸(200 mg/kg)、自噬抑制剂3-MA(10 mg/kg)、H-齐墩果酸+自噬激活剂雷帕霉素(Rapa,1 mg/kg)分别进行治疗。qRT-PCR测人鼻黏膜组织IL-17A和Foxp3的表达以及小鼠各组鼻黏膜组织中RORγt和Foxp3的表达。流式细胞术从PBMC中分选Th17和Treg细胞,并检测PBMC中白细胞介素17A(IL-17A)细胞和叉头样转录因子3(Foxp3)细胞的比例。Western blot法检测Th17和Treg细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3-II、LC3-I、p62的表达。酶联免疫吸附试验检测各组小鼠鼻腔灌洗液中IL-17A和IL-10的表达。结果AR组患者鼻黏膜组织中IL-17A表达显著增加,但Foxp3的表达显著降低(P均<0.05)。齐墩果酸下调PBMC中IL-17A的表达,并上调Foxp3的表达。齐墩果酸抑制Th17细胞和Treg细胞中Beclin1、LC3-II以及LC3-I的表达(P均<0.05),促进p62的表达水平。齐墩果酸降低AR小鼠体内IL-17A和RORγt水平,并上调IL-10和Foxp3的水平(P均<0.05)。结论齐墩果酸通过抑制自噬信号改善AR中Th17/Treg细胞的平衡。     

瞬时受体电位锚蛋白1通道调节慢性鼻窦炎上皮细胞自噬及细胞间黏附分子表达的作用探究

目的　探究瞬时受体电位锚蛋白1（t ransient receptor potential ankyrin1,TRPA1）对慢性鼻窦炎（CRS）上皮细胞自噬与细胞间黏附分子（intercellular adhesion moleclar-1,ICAM-1）表达的影响。方法　通过免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR及Western blot检测TRPA1在对照组、慢性鼻窦炎不伴鼻息肉（chronic nasal-sinusitis without nasal polyps,CRSsNP）及慢性鼻窦炎伴鼻息肉 （chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）患者鼻黏膜组织中的表达水平,并采用免疫组织化学染色和Western blot观察各组患者鼻黏膜组织内自噬水平;分离培养鼻黏膜上皮细胞,利用细胞角蛋白AE1进行免疫荧光染色鉴定上皮细胞;将鼻黏膜上皮细胞随机分为对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+TRPA1抑制剂组,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞TRPA1在mRNA和蛋白上的表达水平,以自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3感染细胞并通过荧光显微镜观察各组细胞自噬情况,并使用透射电镜观测各组细胞自噬小体形成,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞ICAM-1在mRNA和蛋白上的表达水平。结果　相较于对照组,CRSsNP与CRSwNP患者鼻黏膜上TRPA1平均光密度值升高,其mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均上调（P<0.05）,且LC3-II平均光密度值升高,LC3-II/LC3-I比值升高,Beclin-1蛋白相对表达量上调而p62蛋白相对表达量下调（P<0.05）,组织内自噬水平升 高。成功分离到生长密集、形状为梭形或多边形以及AE1呈阳性表达的鼻黏膜上皮细胞;与LPS组比较,经过LPS与TRPA1抑制剂共处理的鼻黏膜上皮细胞TRPA1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调（P <0.05）,自噬溶酶体红色荧光减弱,自噬小体也明显减少,同时,ICAM-1mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调（P<0.05）。结论  CRS中TRPA1表达异常增加,自噬水平也升高,靶向抑制TRPA1能够抑制CRS上皮细胞自噬以及ICAM-1表达的升高。     

青藤碱对缺氧微环境诱导的甲状腺乳头状癌细胞“干性”的影响及机制研究

目的：探讨青藤碱(SME)对缺氧微环境诱导的甲状腺乳头状癌细胞“干性”的影响及机制。方法：采用不同浓度(0.25、0.5和1 mmol/L)的SME处理缺氧条件下的人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞或采用1 mmol/L SME处理缺氧条件下小泛素相关修饰蛋白(SUMO)特异性蛋白酶1(SENP-1)基因过表达的TPC-1细胞。流式细胞术检测肿瘤干细胞亚群(CD44⁺CD24^-)比例；qRT-PCR检测肿瘤干细胞标志物Nanog、八聚体结合转录因子4(OCT4)和SRY盒转录因子2(SOX2)的mRNA表达水平；肿瘤细胞成球实验观察细胞的干性特征；Western blot检测细胞中SENP-1、SUMO1和低氧诱导因子1α(HIF-1α)的蛋白表达水平；试剂盒法检测细胞中HIF-1α蛋白SUMO化水平；免疫荧光染色检测细胞中HIF-1α蛋白分布情况。结果：SME可呈浓度依赖性降低缺氧微环境下TPC-1细胞中干细胞亚群(CD44⁺CD24^-)比例，下调肿瘤干细胞标志物Nanog、OCT4和SOX2的mRN...