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背景：与传统二维培养相比,三维培养软骨微组织具有更大的优势,但仍需进一步探索更有利的三维培养方式。目的：评价2种三维培养方式下微组织的细胞行为及促软骨形成能力。方法：通过化学脱细胞方法和组织粉碎方法制备软骨源性微载体,采用DNA定量和核染色验证脱细胞是否成功,通过组织学染色观察脱细胞前后基质保留情况,采用扫描电子显微镜和CCK-8方法对微载体进行表征;通过三维静态培养法和三维动态培养法将软骨源性微载体与人脂肪间充质干细胞结合构建软骨源性微组织,利用扫描电子显微镜、活死染色、RT-q PCR等手段检测两组微组织的细胞活力及成软骨能力。结果与结论：(1)成功制备软骨源性微载体,与脱细胞前相比,脱细胞后DNA含量显著降低(P <0.001);扫描电子显微镜观察微载体表面有胶原包绕,保持天然软骨细胞外基质特征;CCK-8法检测表明微载体无细胞毒性且能够促进细胞增殖;(2)扫描电子显微镜及活死染色结果显示,相比三维静态组,三维动态组微组织细胞具有更舒展的形态,细胞与细胞间、细胞与基质间、基质与基质间形成广泛的连接;(3)RT-qPCR结果表明两组微组织SOX9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原表达在培养... 相似文献
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目的探讨基于软骨脱细胞外基质微载体体外构建具有功能化和自我更新能力的软骨类器官。方法取新鲜的猪关节软骨, 将部分仅粉碎处理的软骨微粒设置为天然软骨组;利用物理离心化学萃取相结合的脱细胞方法, 制备粒径合适的细胞外基质(ECM)微载体, 设置为微载体组。通过旋转式生物反应器将人脐带干间充质干细胞(hUCMSCs)和人软骨细胞(hCho)按照3∶1的比例与微载体负载, 体外构建软骨类器官, 将诱导不同时间的类器官分为诱导0、7、14及21 d组。4′, 6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染色观察、DNA定量评估微载体组和天然软骨组细胞残留情况;番红O、甲苯胺蓝染色观察微载体ECM保留情况, 二甲氨基苯甲醛比色法测定微载体组和天然软骨组胶原蛋白含量;二甲基亚甲蓝(DMMB)比色法测定微载体组和天然软骨组糖胺聚糖(GAGs)含量。扫描电镜及能谱分析对微载体进行进一步表征;将添加体积分数10%胎牛血清(FBS)的杜尔伯克改良伊戈尔低糖培养基(DMEM)培养的hUCMSCs作为对照组, 将微载体浸提液培养的hUCMSCs作为实验组, 两组分别设置培养1、3、5 d共3个时间点的亚组, 细胞增... 相似文献
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背景 异种交叉循环在器官保存领域的应用已取得一定的成果,但其在肢体组织保存方面效果仍未明确。目的 探究异种交叉循环术保存断足的效果。方法 将因骨肉瘤行截肢手术的断肢再次处理,自踝关节上方约5 cm截断,随后将不含肿瘤的断足主要血管连接至巴马猪股动脉和股静脉,通过趾尖血氧饱和度、趾尖脉率、全血细胞计数和断足肌肉组织形态评估保存效果。结果 成功实施了异种交叉循环术,维持断足肌肉组织正常形态超过4 h。趾尖血氧饱和度64%～99%,趾尖脉率45～106/min。白细胞计数(13.3～19.7)×109/L,淋巴细胞计数(2.1～4.36)×109/L,血小板计数(242～1 534)×109/L。0 h和4 h断足肌纤维形态正常,8 h断足肌纤维排列紊乱,失去部分组织形态。0 h肌间隙血管未充盈,4 h肌间隙血管有红细胞通过,8 h肌间隙血管内形成血栓。结论 异种交叉循环术可维持断足肌肉组织正常形态超过4 h,但如何减少免疫排斥反应仍需进一步研究。 相似文献
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