唐氏综合征发病状况调查分析

目的:回顾性调查分析我院唐氏综合征年检出率的变化趋势,间接了解其发病率,根据相关因素,采取干预措施。方法:回顾性分析1991年4月~2007年7月我院染色体检查资料。结果:1991年4月~2007年7月接受染色体检查的高危人群1 622例,筛查出唐氏综合征患者75例,其中2005年1月~2007年7月3年间检测出的患者绝对数明显增多,年检出率上升,和1991年~2004年年检出率比较,差异有显著性(P<0.01)。但按出生时间将年龄回归后,年发病率不增加,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:①近年来就诊的患者绝对数增多和年检出率的增加是来诊患儿数量增多的结果;年发病率不增是因来诊患儿年龄偏大,也是预防出生缺陷、科学生育、远离畸形等优生优育的宣传工作所取得的社会效益在统计数字中的表现。②唐氏综合征无有效的根治方法,降低发病率必须依靠科技进步,重点做好产前筛查和产前诊断工作;对可能影响唐氏综合征发病率的可控制因素要及时告知广大育龄夫妇,让每一位育龄妇女在准备怀孕或怀孕前,对唐氏综合征的相关知识有所了解,提高他们对产前筛查和产前诊断的依从性;加大宣传力度,健康教育重点放在地处边远山区、文化素质较低的基层单位。     

利用双色实时荧光定量PCR法快速进行产前诊断

目的利用双色实时荧光定量PCR法进行21-三体与18-三体的快速产前诊断。方法分别以21号的APP基因与18号染色体的TYMS基因为目的基因设计引物和不同荧光标记的Taqman探针,以相对定量指标△CT值判断21号与18号染色体的数目;并将其检测结果与传统染色体核型分析方法进行对比。结果60例羊水细胞区分出了4例21-三体,3例18三体标本,正常人的△CT值为-0．89±0．22,21-三体患者及18-三体患者的ACT值分别-0．04±0．17和-1．55±0．24,患者与正常人标本组之间无交叉重叠,均有明显差异（P〈0．001）。结论实验建立的双重实时荧光定量PCR能用于快速诊断羊水细胞的21-三体和18-三体等非整倍体。     

人21号全染色体涂染探针的制备及其唐氏综合征诊断的应用研究

目的人21号染色体DNA涂染探针的制备及其应用于唐氏综合征诊断的研究。方法将显微分离的人21号染色体DNA进行简并寡核苷酸引物PCR（Degenerate Oligonucleotide Primed—PCR,DOP—PCR）扩增并标记制备成杂交探针后,与15例唐氏征疑似患者的外周血细胞核染色体进行荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）分析;同时以常规核型分析进行确诊并评估FISH结果。结果FISH分析诊断结果与常规核型分析一致,其中8例为非唐氏征患者,7例为唐氏征患者,准确率为100％,且非唐氏征患者与唐氏征患者细胞核中21号染色体的检出率分别高达99．12％和99．08％。结论制备的人21号全染色体DNA涂染探针能精确检测人类中期和间期细胞核中21号染色体的数目,该探针可用于唐氏综合征的诊断。     

人21号和18号全染色体涂染探针在快速产前诊断中的应用

目的应用自制的双色探针对人21号和18号染色体的数目进行快速产前诊断。方法将显微分离的人21号和18号染色体DNA分剐进行扩增并标记制备成杂交探针；将两种涂染探针混合后分别与18-三体标本、21-三体标本和正常的染色体核型标本进行荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH），并将其检测结果与传统染色体核型分析方法进行对比。结果FISH分析诊断结果与常规核型分析-致，准确率为100％，且21号染色体和18号染色体的检出率分别为86．6％和87．4％。结论制备的人21号与18号全染色体DNA涂染探针能用于21号和18号染色体的数目的快速产前诊断。     

TaqMan实时荧光定量PCR检测肺炎链球菌

目的利用实时荧光定量聚合酶链反应（实时PCR）方法进行肺炎链球茵的检测和流行病学调查。方法用实时PCR技术扩增并检测400例临床标本的肺炎链球菌的自溶素（1yt）基因,并将其与传统的培养法进行对比。结果400例,临床标本中,实时PCR检测肺炎链球菌为阳性的有78例（阳性率为18％）,传统培养法结果为阳性的有29例（阳性率为7．25％）。结论实时PCR是一种灵敏、特异、快速的检测肺炎链球菌方法,其可用于肺炎链球菌的诊断和流行病学调查。     

一种罕见α-地贫基因突变HbH病（--SEA/α*92A>Gα）的家系分析与基因诊断

目的：鉴定中国南方人群中的一种罕见α-地贫基因突变,以及此突变所致HbH病的家系分析和基因诊断。方法采集家系成员外周全血,进行血液学表型分析和地贫基因常规检测,对常规检测基因型与表型不符的标本进一步DNA测序分析。结果该家系中检出罕见α-地贫基因*92A>G突变,确认先证者及先证者姐姐基因型为--SEA/α*92A>Gα的非缺失型HbH病,先证者哥哥基因型为-α3.7/α*92A>Gα的标准型α-地贫、父亲基因型为αα/α*92A>Gα的静止型α-地贫。结论首次鉴定报道了中国南方人群中罕见α-地贫基因*92A>G突变,以及携带此突变的静止型α-地贫、复合此突变非缺失型HbH病的基本表型特征,丰富了中国人群α-地贫基因突变谱,有助于指导α-地贫的人群筛查、临床基因诊断和遗传咨询。     

全染色体涂染探针FISH技术在AIH产前诊断唐氏综合征的应用

目的:探讨应用自制的人21号全染色体特异DNA涂染探针FISH技术在AIH产前诊断唐氏综合征的应用价值。方法:对经AIH治疗成功受孕的妊娠16～26周孕妇抽取的未培养羊水细胞采用已制备的人21号全染色体特异DNA涂染探针进行荧光原位杂交,同时进行常规细胞培养及染色体核型分析,并比较两种检测方法的结果。结果:自制探针FISH检测均于24 h内出结果,检测出患儿2例,其中1例为标准21三体,1例为X三体。自制的人21号全染色体特异DNA涂染探针对未培养的羊水细胞核21号染色体的符合率高达99.42%,染色体核型分析为47,XXX的患者FISH结果未见异常。检测结果与染色体核型分析及随访相符。结论:人21号全染色体特异DNA涂染探针FISH技术具有快速、准确的优势,大大提早诊断时间,应用于AIH成功受孕高危孕妇的产前筛查唐氏综合征中具有良好的应用价值。     

ABO血液基因型引物特异性PCR体系的构建及在1个B_(w11)亚型家系分析中的应用

目的构建1个简单、有效,用于ABO基因分型的AS-PCR体系,及基于AS-PCR体系的PCR测序方法,并将此方案用于1个B亚型家系分析。方法参照ABO血液基因型cDNA的261,297,467和803位点,通过设计针对这些位点的AS-PCR引物构建可用于ABO血液基因型分型的AS-PCR体系,并将该AS-PCR体系应用于1个B亚型家系进行分析,并依据其分析结论设计PCR测序方法,以进行单体型分型。结果该家系成员母亲和两名子女的基因型分别为O01Bw11、O01Bw11和O02Bw11。结论 AS-PCR体系和PCR测序相结合的方案,操作简单、耗时短、结果准确,可用于ABO亚型的基因型分型。