环媒恒温扩增(LAMP)技术在寄生虫检测中的应用

环媒恒温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种快速、简单、敏感、特异的核酸扩增方法.作为一种新的核酸扩增方法,LAMP法被逐渐应用于寄生虫、病毒、微生物的检测,是最有发展前景的快速诊断方法之一,本文就LAMP技术在寄生虫检测方面的应用发展情况进行综述.     

巢式PCR检测日本血吸虫感染的研究

本研究通过设计2对巢式引物扩增日本血吸虫高拷贝的Sjα1基因片段,建立检测日本血吸虫感染的巢式PCR技术,并对感染小鼠血清、全血样本以及实验和现场钉螺样本进行检测.建立的巢式PCR方法特异性扩增日本血吸虫420 bp的Sjα1片段,和曼氏血吸虫没有交叉,基因组DNA作为模板时最低检测量为0.1fg.小鼠感染日本血吸虫后2周的血清样本中即能检测出特异性DNA,建立的方法能同时检测血清和全血标本.钉螺实验感染4 h后能检测到日本血吸虫DNA,现场采集钉螺的检测结果显示比传统的镜检方法敏感性高.建立的巢式PCR检测日本血吸虫感染具有较高的敏感性和特异性,为疾病诊断和媒介调查提供了新的分子生物学检测技术. PCR技术,并对感染小鼠血清、全血样本以及实验和现场钉螺样本进行检测.建立的巢式PCR方法特异性扩增日本血吸虫420 bp的sja1片段,和曼氏血吸虫没有交叉,基因组DNA作为模板时最低检测量为0.1fg.小鼠感染日本血吸虫后2周的血清样本中即能检测出特异性DNA,建立的方法能同时检测血清和全血标本.钉螺实验感染4 h后能检测到日本血吸虫DNA,现场采集钉螺的检测结果显示比传统的镜检方法敏感性高.建立的巢式PCR检 日本血吸虫感染具有较高的敏感性和特异性,为疾病诊断和媒介调查提供了新的分子     

日本血吸虫嗜肌素样蛋白编码基因的克隆表达及其免疫原性研究

目的克隆和表达日本血吸虫嗜肌素样蛋白(SjcMLP)编码基因,并研究其重组抗原的免疫原性。方法PCR扩增SjcMLP编码基因,并亚克隆人表达载体pQE30。将重组表达质粒pQE 30-SjcMLP转入宿主菌E. coli M15,异丙基-βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用金属Ni螯合物亲和层析柱(Ni-NTA)纯化SjcMLP重组蛋白(reSjcMLP)。纯化的reSjcMLP采用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blot)作进一步分析。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定用reSjcMLP免疫C57BL/6小鼠血清中的抗体水平。结果 SDS-PAGE分析表明获得的重组抗原的大小约24.8 kDa,与预的融合蛋白大小相符。Western blot昱示该重组抗原能被日本血吸虫尾蚴感染兔血清识别。用该重组抗原包被进行ELISA检测,免疫血清滴度高达1：12 800。但动物免疫试验结果减虫效果不明显。结论SjcMLP编码基因以可溶性融合蛋白的形式得到表达,动物免疫试验未诱导出明显的保护力     

抗日本血吸虫SEA纳米抗体制备与分析

利用制备的日本血吸虫虫卵抗原(SEA),免疫健康双峰驼Bactrian camel,分离其外周血淋巴细胞提取总RNA,利用RT-PCR扩增骆驼重链抗体IgG可变区(VHH)基因片段,将VHH片段与载体pMECS连接后电转入大肠杆菌TG1构建纳米抗体文库.经亲和筛选、phage-ELISA以及测序分析后,挑取阳性克隆,抽提质粒,电转入大肠杆菌WK6诱导表达纳米抗体.通过间接ELISA分析纳米抗体VHH-1的敏感性和特异性.结果显示,纳米抗体文库容量为2.3 ×108,测序分析显示,所获得的纳米抗体文库具有良好的多态性.经NI-NTA和AKTA纯化后获得高纯度纳米抗体.ELISA分析表明所获得的纳米抗体VHH-1具有较好的敏感性和特异性.为进一步开展纳米抗体在日本血吸虫诊治研究中的应用奠定一定基础.     

重组弓形虫棒状体蛋白5诱导小鼠的免疫应答及其抗弓形虫感染的保护作用

为探讨重组弓形虫棒状体蛋白5诱导的免疫应答及其免疫保护效应,本研究克隆表达了弓形虫棒状体蛋白5,并分析其诱导的细胞免疫、体液免疫应答和抗弓形虫感染的保护作用。采用PCR方法从刚地弓形虫cDNA中扩增出ROP5基因片段,将该基因片段克隆至pET-28a原核表达载体表达,用重组ROP5蛋白免疫BALB／c小鼠,ELISA检测免疫后小鼠抗体和细胞因子的变化。以强毒型RH株弓形虫攻击感染免疫小鼠,统计小鼠不同时间存活率,评价重组蛋白产生的免疫保护性。结果表明ROP5重组蛋白疫苗免疫BALB／c小鼠诱导机体产生高水平的IgG、IgG1、IgG2a抗体和IFN—y、IL-2及IL-10细胞因子。与PBS及佐剂对照组相比,重组蛋白免疫组小鼠的存活时间明显延长。本实验证实了ROP5重组蛋白免疫BALB／c小鼠能够诱导其产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,以及一定的抗弓形虫感染保护作用。     

日本血吸虫感染分子诊断技术的研究

目的建立检测日本血吸虫感染的巢式PCR技术。方法设计2对巢式引物特异性扩增日本血吸虫高拷贝的Sjα1基因片段,分析反应的敏感性和特异性,并对感染小鼠血清、全血样本以及实验和现场钉螺样本进行检测。结果建立的巢式PCR方法特异性扩增日本血吸虫420bp的Sjα1片段,和曼氏血吸虫没有交叉,基因组DNA作为模板时最低检测量为0.1fg。小鼠感染日本血吸虫后2周的血清样本即能检测出特异性DNA,建立的方法能同时检测血清和全血标本。钉螺实验感染4hr后能检测到日本血吸虫DNA,现场采集钉螺的检测结果显示比传统的镜检方法敏感性高。结论建立的巢式PCR检测日本血吸虫感染具有较高的敏感性和特异性,为疾病诊断和媒介调查提供了新的分子生物学检测技术。     

免疫佐剂在寄生虫核酸疫苗中的应用研究

核酸疫苗是近年发展起来的一种新型疫苗,它能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫应答,能够抗病毒、细菌和寄生虫的感染,对自身免疫性疾病和过敏性疾病也有一定的疗效。但与传统的灭活疫苗相比,其免疫效价还比较低。目前研究表明,一些免疫佐剂如细胞因子、CpGODN等有助于提高核酸疫苗的免疫效价,这为更有效、安全的核酸疫苗的研制开发开辟了新的思路。本文就应用免疫佐剂提高寄生虫核酸疫苗免疫效价的最新研究进展做一综述。     

血吸虫病流行的地理信息系统分析

目的 应用地理信息系统(GIS)分析血吸虫病的空间分布和流行趋势.方法 收集安徽省铜陵县2004年和2008年血吸虫病抽样调查资料,建立GIS数据库,应用ArcGIS9.3空间分析扩展模块中的反距离加权插值法对钉螺面积、钉螺阳性率和人群感染率差值进行空间分析.结果 2004与2008年螺感染率差值图显示,铜陵县江心洲南部的老洲乡螺阳性率显著下降,而江心洲北部尤显著下降趋势,铜陵县山丘内陆地区螺感染率也无明显变化.螺面积差值图显示近年来铜陵县的有螺面积尤显著变化趋势.人群感染率差值图显示江心洲的大部分区域人群感染率下降,山丘内陆地区无显著下降趋势.结论 应用GIS制作的差值空间分布图能直观地揭示和分析血吸虫病的疫情变化,结果 显示全面实施"以机代牛"、"改水改厕"等传染源控制为主的措施后,钉螺阳性率和人群感染率明显下降,不失为控制洲岛型血吸虫病流行的有效措施.     

血吸虫免疫逃避相关分子的研究进展

当细菌等病原生物钻穿皮肤、粘膜而入侵宿主后 ,宿主的免疫系统即可产生免疫应答而最终消除病原体。但是 ,也有许多致病生物能在具有免疫能力的宿主体内长期存活。在长期进化过程中 ,一些寄生虫在哺乳动物体内形成慢性感染 ,具有逃避宿主致死的免疫应答的能力[1] 。血吸虫在人和多种哺乳动物宿主体内寄生阶段包括童虫、成虫和虫卵。当血吸虫入侵宿主后 ,抗原物质即刺激宿主免疫系统产生免疫应答 ,但宿主体内原有的成虫并不受影响 ,仍存活 ,并可对再次入侵的血吸虫尾蚴起到清除或杀伤作用 ,此乃称为伴随免疫 (concomitantimmunity)。     

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗...