脂蛋白脂肪酶基因突变的研究

目的：筛查国人脂蛋白脂肪酶(LPL)基因的突变，并探讨其与高甘油三酯血症的关系。方法：对高甘油三酯血症组(48例)和正常甘油三酯对照组(121例)的各扩增片段进行分析，电泳图谱异常者进行PCR产物测序。对于频率较高的多态性位点，引入限制性核酸内切酶位点利用PCR-RFLP进行鉴定。结果：在高甘油三酯血症人群中，检出2例内含子3受位剪接点上游6bp的C→T转换的突变杂合子，1例外显子5Pm^207→Leu突变杂合子，在全部样品中检出1例Ser^447→stop突变纯合子，50例Ser^447→stop杂合子。结论：天津地区人群中存在着LPL基因突变，除Ser^447→stop外，内含子3和外显子5的突变多与高甘油三酯血症相关，可能是高甘油三酯血症的遗传易感因子。     

国人脂蛋白脂肪酶基因突变的筛查

目的筛查天津地区脂蛋白脂肪酶基因突变情况,并探讨其对血脂水平的影响。方法利用聚合酶链反应—单链构象多态性分析技术对386例样本(血脂正常组278例,血脂异常组108例)的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查,对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。对于频率较高的多态性位点,引入限制性核酸内切酶位点利用聚合酶链反应限制片长多态性进行鉴定。结果在386例样本中,共检出4种突变,检出率为14.5%,其中1例为目前国内外未见报道的外显子3 Leu103→Leu同义突变杂合子,1例为目前亚洲首报的外显子5 Pro207→Leu突变杂合子,3例内含子3受位剪接点上游6 bp的C→T转换的突变杂合子,1例Ser447→stop突变纯合子,50例Ser447→stop突变杂合子。结论我国天津地区人群存在着广泛的脂蛋白脂肪酶基因变异,既具有与大多数国家相同的Ser447→stop多态性位点,也具有自身的特点。     

一种新的脂蛋白脂肪酶基因突变（C^56→T）

目的：筛查国人（天津地区）脂蛋白脂肪酶基因突变情况，并探讨其对血脂水平的影响。方法：利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术，对386例患者（血脂正常组278例，血脂异常组108例）的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查，对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。结果：在386例样本中，检出1例外显子3 C^56→T（Leu^103→Leu）同义突变杂合子。结论：新LPL突变（C^56→T）的发现，对进一步阐述IJPL结构与功能的关系有重要的参考价值。     

PCR-SSCP法测定人载脂蛋白E基因型

目的：建立一种既可以测定人载脂蛋白E常见基因型，又可以筛查罕见异构体的新方法。方法：利用RFLP和SSCP法对人载脂蛋白E编码基因的PCR扩增产物进行基因型的检测和分析，采用双脱氧DNA链合成终止法进行PCR产物直接测序，确认基因型的测定结果。结果：两种方法测得的基因型结果完全相符，并经测序证实结果正确。结论：PCR-SSCP法对于单碱基突变的高检出率使其具有筛查罕见异构体的可能，同时该法还可以准确快捷地进行人载脂蛋白E常见基因型的测定。     

脂蛋白脂肪酶Pro207→Leu基因突变致高甘油三酯血症

目的探讨高甘油三酯血症与脂蛋白脂肪酶基因突变之间的内在联系.方法采用PCR-SSCP和DNA测序技术,对1例随访多年的高甘油三酯血症患者LPL基因第1～9个外显子、部分内含子和5'端调节区进行筛查.结果该患者经检测确定为LPL外显子5 Pro207→Leu错义突变.对先证者全家进行家系分析,证实家系中先证者及其父亲均为高甘油三酯血症患者,且均为LPL外显子5 Pro207→Leu错义突变.结论推测此突变影响了LPL分子的活性中心的形成,从而降低了催化活性,导致了高甘油三酯血症的发生.     

脂蛋白脂肪酶基因Ser~(447)→stop变异对血脂水平的影响

目的探讨国人脂蛋白脂肪酶基因外显子9特别是Ser447→stop变异对血脂水平的影响.方法利用聚合酶链反应-单链构象多态性技术筛查基因突变,利用DNA测序和聚合酶链反应-限制片长多态性技术确定突变的性质,并分析突变与血脂水平的关系.结果在420例甘油三酯正常(<1.7 mmol/L)人群检出78例突变,其中1例为纯合子,77例为杂合子;经DNA测序和聚合酶链反应-限制片长多态性技术分析突变均为Ser447→stop无义突变.Stop447携带频率和等位基因频率分别为18.6%和9.4%.Stop447携带组的甘油三酯水平(1.05±0.32 mmol/L)低于Stop447非携带组(1.13±0.28 mmol/L)(P<0.05);Stop447携带组的高密度脂蛋白胆固醇水平(1.28±0.28 mmol/L )虽然高于Stop447非携带组(1.25±0.27 mmol/L),但无统计学差异(P>0.05 ).结论国人基因外显子9突变单一,仅表现为Ser447→stop多态性,Ser447→stop变异可能有较弱的降低甘油三酯的作用.     

天津地区国人CETP第14内含子+1位G→A突变的检测

目的：检测胆固醇酯转移蛋白第14内含子 1位G→A突变。方法：利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术检测该突变，首先扩增胆固醇酯转移蛋白目的基因片段，产物经限制性内切酶Ndel消化后，用琼脂糖凝胶电泳分析。结果：95例健康体检者中发现1例杂合子突变，突变率约为1．05％。结论：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术检测该突变简便、易行、可靠。     

一种新的脂蛋白脂肪酶基因突变(C562→T)

目的:筛查国人(天津地区)脂蛋白脂肪酶基因突变情况,并探讨其对血脂水平的影响。方法:利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术,对386例患者(血脂正常组278例,血脂异常组108例)的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查,对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。结果:在386例样本中,检出1例外显子3C562→T(Leu103→Leu)同义突变杂合子。结论:新LPL突变(C562→T)的发现,对进一步阐述LPL结构与功能的关系有重要的参考价值。     

脂蛋白脂肪酶外显子9基因突变研究

目的 :筛查国人脂蛋白脂肪酶 (LPL)外显子9基因突变和Ser447→stop突变频率 ,并探讨该突变对血脂水平的影响。方法 :依血脂测定结果 ,将169例分为高甘油三酯血症组(HTG组 ) ,48例和正常甘油三酯组(对照组 )121例 ,利用聚合酶链反应 -单链构象多态性和聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性分析技术对待测人群的LPL基因外显子9及其相邻内含子区域进行突变筛查 ,并对典型单链构象电泳图谱携带者进行PCR产物测序。结果 :在169例中检出1例Ser447→stop突变纯合子 ,50例Ser447→stop杂合子 ,未检出其它位点的突变 ;HTG组的Ser447→stop突变检出率 (25.0 % ,12/48)明显低于对照组 (31.4 % ,38/121) ,HTG组的Stop447 等位基因频率(12.5% )明显低于对照组 (16.5% ),两组比较差别均有统计学意义(P<0.01)。结论 :我国人群中LPL外显子9突变种类单一 ,Ser447→stop是一高频率的多态性位点 ,Stop447等位基因可能有轻微的降低血浆甘油三酯的作用。     

PCR—SSCP法检测CETP第15外显子基因突变

目的：检测胆固醇脂转移蛋白第15外显子基因突变及其性质。方法：利用PCR－SSCP方法检测CETP第15外显子的基因突变。根据双脱氧DNA链合成终止法对PCR产物直接测序,确定基因突变的性质。结果：16例高HDL－C个体中发现了2例杂合子突变,经测序证实为第1506位核苷酸A→G突变。结论：在高HDL－C个体中存在较高的CETP第15外显子基因突变,PCR－SSCP和DNA测序技术是确定基因突变存在和性质的简便易行的技术和方法。