HAV 3a与3d融合蛋白在原核系统中的表达及其抗原活性的研究

目的 研究HAV 3a(位于1403-1456aa)与3d(位于1719-1764aa)融合蛋白在原核系统中的表达，并探讨该重组蛋白的抗原活性及其应用价值。方法 采用常规PCR方法，从克隆有HAV HM175株全长cDNA基因的克隆载体pHAVl6H1上扩增出目的基因，以pET—30a作为表达载体，构建重组表达质粒pET—3ad。该重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达。采用镍金属柱螯和亲和层析纯化的方法对重组蛋白进行纯化。以Western blot和间接ELISA的方法检测重组蛋白的抗原活性。结果 重组质粒pET—3ad经双酶切(Nco I／Hind Ⅲ)鉴定和序列测定证实构建成功。在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达有一相对分子质量为18000的重组蛋白P3ad，该蛋白经亲和层析获得了良好的纯化效果。Western blot结果显示在相对分子质量为18000处有一特异的免疫印迹条带，表明重组蛋白P3ad具有特异的抗原活性；间接ELISA方法进一步证实了该蛋白的抗原性。结论 采用常规的克隆操作方法构建了重组表达质粒pET—3ad，其表达量为20％。表达产物具有良好的抗原性，有望应用于急性HAV感染的诊断和区分活病毒的感染及灭活疫苗的免疫。