乳果糖口服液预防肝硬化患者消化道出血并发肝性脑病的临床研究

将我院2012年9月²014年3月收治的62例肝硬化导致消化道出血患者按不同治疗方案随机均分为对照组和观察组,两组患者均给予常规对症治疗,观察组在此基础加用乳果糖口服液,连续治疗7d,期间观察两组患者肝性脑病发生情况及对治疗前后NCT结果变化进行比较。结果观察组肝性脑病发生率(6.45%)明显低于对照组(25.81%)(P<0.05);经治疗7d后,对照组NCT结果明显延长(P<0.05),且多于观察组(P<0.05),同时观察组治疗前后NCT结果无明显变化(P>0.05)。乳果糖口服液用于临床预防消化道出血患者并发肝性脑病效果显著,能够稳定患者意识状态,值得临床推广应用。     

骨髓间充质干细胞向肝样细胞的诱导及分化

背景：研究表明,在体外提供肝细胞及成纤维细胞生长因子等多种因子可诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化,但对其诱导的最佳环境还处于摸索阶段。目的：观察体外应用肝细胞生长因子和成纤维生长因子 4 等多种因子联合诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞的分化能力。方法：采用全骨髓贴壁培养法分离、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,培养第 3 代时用肝细胞生长因子、成纤维生长因子 4、胰岛素铁硒传递蛋白及地塞米松等联合诱导其向肝样细胞的分化。于诱导 7,14,21 d 后观察细胞形态变化,RT-PCR 检测细胞白蛋白、甲胎蛋白、细胞角蛋白的 mRNA 表达;于诱导 14,21 d 行 PAS 糖原染色检测,并采用免疫细胞荧光法检测细胞白蛋白表达。结果与结论：随着诱导时间的延长,骨髓间充质干细胞表现为肝细胞样,并呈集落生长,肝细胞特异性标志物逐渐出现和成熟。细胞诱导至 7 d 出现甲胎蛋白 mRNA 表达,14 d 表达增高,21 d 时表达下降;14 d 时细胞角蛋白 18、白蛋白 mRNA和糖原出现表达,并随时间延长表达逐渐增加。细胞诱导 14 d 时,胞浆白蛋白出现表达,至 21 d 时表达增强。证实骨髓间充质干细胞在肝细胞生长因子、成纤维生长因子 4 等多种因子诱导作用下,具有强大的向肝细胞分化能力。     

Ras/MAPK信号通路参与Galectin-3介导大肠癌细胞系LoVo增殖调控的研究

目的:探讨Ras/MAPK信号通路是否参与了Galectin-3介导的大肠癌细胞系LoVo增殖的调控。方法:以未转染的及转染空质粒的LoVo细胞分别作为阴性对照组和阳性对照组,以前期实验中构建的Galectin-3shRNA序列并成功转染的LoVo细胞作为实验组,免疫印记方法分别检测Ras/MAPK信号通路中的ERK1/2及phospho-ERK1/2、MEK1及phospho-MEK1、K-Ras及PKC信号蛋白在干扰前后的表达情况。结果:ERK1及ERK2在干扰组表达水平与对照组相比明显减弱,F值分别为43.650和20.727,P<0.05。phospho-ERK1及phospho-E-RK2在干扰组表达水平与对照组相比明显减弱,F值分别为838.029和627.082,P<0.05。MEK1及phospho-MEK1、K-Ras、PKC蛋白激酶在干扰组的表达水平与对照组比较均显著减弱,F值分别为159.101、656.148、5737.496和663.855,P<0.05。两对照组比较差异无统计学意义。结论:ERK1/2及phospho-ERK1/2、MEK1及phospho-MEK1、K-Ras及P...     

急性高脂血症性胰腺炎临床特征探讨

目的：通过对急性高脂血症性胰腺炎和急性胆源性胰腺炎的临床特征对比分析明确前者对临床诊断和治疗的指导意义。方法以该院收治的2010年1月—2013年12月128例急性胰腺炎患者作为研究对象,其中急性胆源性胰腺炎ABP92例、急性高脂血症性胰腺炎AHP23例、（酒精性胰腺炎8例以及其他类型5例）。比较分析二者在脂肪肝、糖尿病发生率以及肝功能受损和血淀粉酶等关系,（急性高脂血症性胰腺炎CTSI,ABPAPACHE评分高。结果急性高脂血症性胰腺炎在脂肪肝发生率、糖尿病发生率、血脂、重症急性胰腺炎等方面要显著高于急性胆源性胰腺炎,而在肝功能受损以及血清淀粉酶等方面明显低于急性胆源性胰腺炎,两者差异有统计学意义（P＜0.05）。结论急性高脂血症性胰腺炎具有血脂高、血清淀粉酶低、病情重等和一般急性胰腺炎不同的临床特征,充分了解这些临床特征有利于进行临床诊断和治疗。     

Galectin-3在不同病理分期大肠癌中的差异表达研究

目的探讨galectin-3在三种不同病理分期的大肠癌细胞中的差异表达，及其表达与大肠癌病理特征的关系。方法体外培养SW1116、W480和LOVO3种不同病理分期大肠癌细胞株，用RT—PCR方法研究galectin-3在mRNA水平的表达；Western-blot方法研究galectin-3在蛋白水平的表达，用免疫细胞化学方法对galectin-3进行细胞定位研究。结果galectin-3主要表达在大肠癌细胞浆中，在细胞膜也有少量表达。在Duck＇s分期依次为A期-D期的三种大肠癌细胞株：SW1116-SW480-LOVO细胞中，galectin-3的表达在mRNA水平和蛋白水平都依次增强，各纽间都有统计学意义（P〈0．05）。结论galectin-3主要表达在大肠癌细胞浆和胞质中，Galectin-3在大肠癌细胞中的表达与大肠癌细胞的恶性程度有关，可作为大肠癌转移的指标。     

筛选鉴定Thy-1标记阳性肝癌细胞系中的卵圆细胞样干细胞：可能是肝肿瘤干细胞吗？☆

背景：肝癌的转移复发被认为可能存在有肿瘤干细胞,后者在肿瘤细胞中数目极少,使得临床鉴别存在一定困难。Thy-1是卵圆细胞的表面标记蛋白,通过特异性标记物间接证明肿瘤中存在肿瘤干细胞是目前研究的重点。 目的：探讨肝癌细胞中是否存在Thy-1标记阳性的卵圆细胞,并进行筛选鉴定。 方法：流式细胞仪检测卵圆细胞标记蛋白Thy-1在肝癌细胞HepG2,BEL7402及正常肝细胞QSG7701的阳性表达情况,免疫磁珠分选Thy-1标记阳性的肝癌细胞,免疫荧光鉴定分选效率。裸鼠皮下接种实验设立3组,Thy-1+细胞组裸鼠于背部皮下接种分选的Thy-1+细胞5×105/只,HepG2细胞阳性对照组同法接种HepG2细胞0.5×107/只,Thy-1-细胞阴性对照组同法接种分选的Thy-1-细胞0.5×107/只,1个月后观察各组成瘤性。 结果与结论：卵圆细胞表面标记蛋白Thy-1在肝癌细胞HepG2,BEL7402中的表达明显高于正常肝细胞QSG7701(P < 0.05)。Thy-1+细胞组免疫荧光染色阳性率为85%,HepG2细胞阳性对照组为1%,Thy-1-细胞阴性对照组几乎无免疫荧光表达。HepG2细胞阳性对照组、Thy-1+细胞组5只裸鼠全部成瘤,且瘤体体积相对较大;而Thy-1-细胞阴性对照组仅有1只裸鼠成瘤,瘤体体积明显小于前2组(F=144.568,P < 0.05),提示肝癌细胞中存在Thy-1标记阳性的卵圆细胞样干细胞,其可能是肝癌细胞中的肿瘤干细胞。     

福建地区汉族人乙型肝炎肝硬化与人类白细胞抗原Ⅰ类基因的相关性

目的：研究人白细胞抗原（HLA）-A基因多态性与福建地区汉族人乙型肝炎肝硬化的遗传易感性关系．方法：以93例福建地区汉族人群乙型肝炎肝硬化患者（病例组）为研究对象,以同一地区84例健康人为对照人群（对照组）,采用DNA测序分型技术（SBT）对HLA—A等位基因精确分型,计算各组等位基因频率．对对照人群等位基因分布进行Hardy—Weinberg遗传平衡检验,应用遗传统计方法进行关联分析,确定与乙型肝炎肝硬化相关的易感基因及基因型．结果：HLA—A等位基因差异显著性检验：病例组A＊24（20．33％vs9．52％,x^2=7．938,P=0．005）,A＊2402（19．23％vs8．33％,x^2=7．212,P=0．009）和A＊01（5．49％vs1．19％,x^2=4．878,P=0．027）,A＊0101（4．95％vs0．60％,x^2=5．955,P=0．015）等位基因频率明显高于对照组．病例组A＊33（3．85％vs9．52％,x^2=4．587,P=0．032）,A＊3303（4．40％vs9．52％,x^2=4．440,P=0．032）基因频率也低于对照组．等位基因多因素分析：HLA—A＊24主型（OR=2．397,95％CI：1．206～4．766,P=0．0126）和A＊2402亚型（OR=2．685,95％CI：1．306～5．521,P：0．0072）在病例组与对照组之间分布差异具有显著性．基因型多因素分析：A2402（OR=3．254,95％CI：1．320～8．021,x^2=6．5703,P=0．0104）和A0201（OR=2．411,95％CI：1．147～5．068,x^2=5．399,P=0．0203）在病例组与对照组之间的差异也具有显著性．基因型剂量一效应关系分析：乙型肝炎肝硬化与H1A—A2402基因型剂量线性相关（OR=2．020,95％CI：1．095—3．728,x^2=5．0624,P=0．0244）．结论：HLA-A＊2402等位基因及其基因型与乙型肝炎肝硬化存在阳性关联,可能是慢性乙型肝炎病毒感染肝硬化形成的易感基因．     

利用RNA干扰技术抑制Galectin-3的表达对人大肠癌细胞系LOVO增殖和凋亡的影响

目的:观察Galectin-3表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为肿瘤基因治疗的方法。方法:实验于2005-06/2006-12在南方医院消化研究所完成。从PubMed的序列号NM-002306中按照引物设计软件设计并化学合成4条Galectin-3小干扰片断,从中选出有效的干扰片断,并顺势转染大肠癌细胞系LOVO(为Galectin-3siRNA组),用未转染细胞做为正常对照,以转染阴性干扰片断作为空白对照,免疫印记法验证干扰结果,MTT方法观察干扰后24,48和72h各组细胞增殖吸光度(A值),流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:①用顺势转染的方法成功转染了Gal-3siRNA片断,转染后72h收集细胞并提取细胞浆蛋白,免疫印记法验证结果显示Galectin-3siRNA组灰度值(55.790)与正常对照(97.234)及空白对照的灰度值(90.459)相比,galectin-3表达明显减弱(P<0.05)。②细胞增殖情况:干扰后24,48和72hGalectin-3siRNA组细胞继续生长,但细胞生长减慢,A值低于正常对照和空白对照(24h:1.018±0.002,1.478±0.185,1.169±0.005;48h:2.049±0.008,2.635±0.003,2.532±0.009;72h:2.512±0.506,3.213±0.006,3.060±0.002;P均=0.000)。③细胞凋亡率:各组中凋亡中晚期均多于早期,Galectin-3siRNA组高于正常对照和空白对照[早期:(15.900±2.508)%,(3.813±1.305)%,(5.780±1.56)%;中晚期:(19.750±0.780)%,(5.050±0.120)%,(7.667±0.145)%;P均=0.000]。结论:成功转染并抑制了galectin-3在大肠癌细胞系lovo中的表达,干扰后细胞增殖减慢,凋亡增加。     

Galectin-3 shRNA载体的构建表达及其对大肠癌细胞lovo增殖率的影响

目的: 构建galectin-3 shRNA真核表达载体,观察该基因的抑制对大肠癌细胞系lovo细胞增殖率的影响. 方法: 以未转染lovo细胞作为阳性对照组,转染空质粒的lovo细胞作为阴性对照组,将针对人galectin-3基因的不同部位设计的长度约140 bp的shRNA,插入到真核表达载体PRNAT-U6.1并转染人大肠癌细胞lovo,双酶切鉴定重组载体,免疫荧光检测转染效果, RT-PCR和Western-Blot检测其对该基因mRNA和蛋白水平的抑制,MTT测定干扰后对lovo细胞增殖率的影响. 结果: 双酶切出一条约120 bp的DNA片断,与插入片断长度相符. PRNAT-U6.1/Galectin-3 shRNA表达载体顺势转染lovo细胞72 h后检测转染效率及Galectin-3在mRNA和蛋白水平的表达情况, 免疫荧光检测转染效率为62%. 转染PRNAT-U6.1/Galectin-3 shRNA的lovo细胞Galectin-3的表达在mRNA和蛋白水平均明显下降,各组间比较F=2.214,148.566, P=0.000, 0.000,阴性组和阳性对照组相比,P=0.448,0.263. 干扰后细胞继续生长,与干扰前相比,生长明显减慢,F=20.830, P=0.000, 组间比较F=149.710, P=0.000,shRNA干扰组与阴性组和阳性组比较,P=0.000, 0.000. 结论: 成功构建Galectin-3 shRNA表达载体,干扰后Galectin-3在mRNA和蛋白水平的表达明显降低,Galectin-3表达的抑制可能会导致大肠癌细胞lovo增殖率的降低.     

瘤干细胞标志物CD133、CD90、CD44、ALDH1的表达与肝癌预后、代谢指标间的关系

目的 探讨瘤干细胞标志物CD133、CD90、CD44、乙醛脱氢酶1(ALDH1)的表达与肝癌预后、代谢指标间的关系.方法 选取我院收治的36例肝癌患者,测定其肝癌切除标本及外周血中瘤干细胞标记物CD133、CD90、CD44、ALDH1的表达情况,检测代谢指标并随访复发情况,观察瘤干细胞标记物的表达与肝癌预后、代谢指标间的关系.结果 CD133与CD90共表达及CD133与CD44共表达患者术后复发率均高于非共表达患者,CD133与CD90共表达及CD133与CD44共表达患者血糖值均低于非共表达患者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肝癌患者瘤干细胞标记物CD133、CD90、CD44、ALDH1不同程度表达,CD133与CD90共表达以及CD133与CD44共表达与患者预后以及血糖值存在联系.