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1.
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3.
昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定 总被引:18,自引:0,他引:18
目的 提高昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)建株的成功率。方法 收集小鼠3.5d的囊胚培养,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,形成的ES细胞样集落,经两次亚克隆分离培养ES细胞;进行相差显微镜观察、碱性磷酸酶染色和体内外分化能力鉴定。结果 获得两个稳定ES细胞集落,传至第11代。ES细胞呈集落样生长,碱性磷酸酶染色强阳性,体外分化的细胞沿拟胚体外向性生长,形态多样,在体分化可形成来源于3个胚层的组织。结论 两次亚克地获得的细胞具有ES细胞主要的生物学性状,有助于提高昆明小鼠ES细胞建株的能力。 相似文献
4.
秦茂林 《华南国防医学杂志》1985,(1)
阴虚盗汗一名,见于《赤水玄珠·汗门》。其症见睡时汗出,醒时即止,烦热、口干、脉细数等。《中医名辞术语选释》认为其病机:“多因阴虚内热,迫汗外泄所致”;或云:“阴不制阳,浮阳外越所致”但这并没解释清楚为什么偏偏在睡时“盗汗”,醒时何以汗止?按理说,昼为阳,夜为阴;动为阳,静为阴。夜晚或睡眠时属阴,阴虚证在阴气盛时病症本应轻缓,何以在睡眠后阴盛时反而热迫汗出?而醒时阳 相似文献
5.
本文报告40例胃粘膜病理观察结果,以探讨胃病中各型脾虚证与组织学的关系。本组60%病例有慢性萎缩性胃窦炎。在脾虚血瘀型、脾胃湿热型及肝胃不和型中,有85%伴急性炎症;脾胃虚寒型中75%伴萎缩性胃窦炎。 相似文献
6.
背景:神经轴突再生是治疗中枢神经系统损伤必须克服的困难之一,包括移植神经干细胞、胚胎干细胞和许旺细胞等在内的细胞移植疗法已取得显著疗效,然而供体细胞不足的瓶颈限制了其发展。目的:观察维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化过程,找到其最佳分化为神经细胞的条件。设计:非随机对照实验。单位:解放军第三军医大学组织胚胎学教研室。材料:实验于2000-01/05在解放军第三军医大学基础部组织胚胎学教研室完成。发情期昆明种小鼠18只,雌12只,雄6只,2∶1同笼交配,阴栓检出日记为受孕1d。MESPU35胚胎干细胞株。方法:孕13~16d的小鼠胚胎,去头,胸腹腔脏器及四肢后,制备饲养层细胞。①采用饲养层贴壁培养增殖MESPU35胚胎干细胞,经典4-/4 法(即拟胚体自然生长4d,不加维甲酸,随后4d添加维甲酸诱导形成高比例神经拟胚体的方法)诱导其神经定向分化,不同浓度血清培养拟胚体,相差显微镜观察不同血清浓度下神经样拟胚体并计数。②免疫细胞化学技术观察各个分化时相点(5,9,14d)和不同维甲酸浓度下分化细胞形态学特征,流式细胞仪计数分化神经细胞比例。主要观察指标:①维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化后神经拟胚体形成中突起和细胞体长度估计测量。②免疫细胞化学染色分化细胞形态观察及流式细胞仪测量分化细胞比例。结果:①相差显微镜观察发现不同血清浓度对拟胚体形成后神经定向分化有一定影响,血清浓度过高和过低降低了拟胚体神经分化比例,5%血清浓度分化比例高。②免疫细胞化学观察维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化形成的NF200阳性细胞和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的比例随分化时相点和维甲酸浓度升高而升高,NF200阳性细胞形态由无突起变为多极细胞,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞突起由短变长,最后联结成网状。③流式细胞仪检测分化产生的胶质纤维酸性蛋白、NF200阳性细胞比例变化类似免疫细胞化学。结论:维甲酸配合合适的血清浓度、分化时相点等条件能够诱导MESPU35胚胎干细胞高比例神经分化,其分化调节以浓度依赖模式和时间依赖模式进行。 相似文献
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目的:由胚胎干细胞分化的神经细胞移植能够在一定程度上恢复脊髓损伤模型动物的功能,此发现使胚胎干细胞成为一种用于移植学研究的重要工具.观察经NT3基因转染修饰的小鼠MESPU35(ES-NT3)胚胎干细胞株移植对脊髓损伤动物脊髓结构和功能重建的恢复效果.方法:实验于2004-09/12在解放军第三军医大学组织胚胎学教研室实验室完成.①材料:清洁级成年Wistar大鼠36只,随机数字表法分为模型对照组、未转染细胞移植组、基因转染细胞移植组,12只,组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.移植所用MESPU35细胞株和ES-NT3细胞株均由本室冻存.②实验方法:复苏MESPU35和ES-NT3细胞株,采用经典维甲酸4-/4 法诱导两种胚胎干细胞神经定向分化,收集分化9 d后的细胞,调整细胞终浓度至5×1010L-1备用.各组大鼠均建立L4脊髓损伤模型,在脊髓完全横断后10 min内,基因转染细胞移植组分多点缓慢注入ES-NT3胚胎干细胞悬液,2μ L/点,细胞总数约4×105个,注射位置为损伤区域白质与灰质交界处;未转染细胞移植组同法注射MESPU35胚胎干细胞悬液,模型对照组注射等量生理盐水.③实验评估:各组大鼠分别于术前、术后即刻、术后15 d和30 d进行后肢运动功能Tarlov评分检测,分数越低表示运动功能恢复越差.后肢运动功能检测30 min后进行斜板实验,检测大鼠抓握和维持姿势能力.微型注射器将25%的辣根过氧化物酶2μL注入大鼠坐骨神经内,2d后取L1-L4脊髓常规冰冻切片,参照Mesulam法进行过氧化物酶逆行追踪.结果:因细菌感染,模型对照组、未转染细胞移植组、基因转染细胞移植组各死亡2只、1只、2只.①后肢运动功能检测:各组大鼠术后即刻后肢运动功能评分为0.术后15 d,30d与模型对照组比较,未转染细胞移植组后肢运动功能评分升高(P<0.01),但未达到正常水平;基因转染细胞移植组恢复程度最高,后肢运动功能评分基本接近正常水平,明显高于未转染细胞移植组(P<0.05).②斜板试验:与后肢运动功能检测结果基本相似.③辣根过氧化物酶逆行追踪情况:模型对照组未见阳性神经元.术后30 d基因转染细胞移植组阳性神经元增至最多,脊髓结构恢复情况优于未转染细胞移植组.结论:经NT3基因转染修饰的鼠MESPU35胚胎干细胞向神经定向诱导分化后,移植治疗脊髓损伤大鼠能更好地促进脊髓功能恢复和结构重建. 相似文献
10.
ES-NT3细胞的神经定向诱导分化 总被引:3,自引:0,他引:3
目的了解维甲酸(retinoic acid,RA)对ES-NT3细胞的神经诱导分化的影响.方法转染NT3基因后的MESPU35胚胎干细胞(ES-NT3细胞),4-/4 法诱导其神经定向分化.结果相差显微镜观察ES-NT3细胞诱导分化的神经样细胞拟胚体百分率随分化时相点延长而升高;免疫细胞化学观察ES-NT3细胞诱导分化形成的NF200阳性细胞和GFAP阳性细胞的比例随分化时相点延长而升高,二者总和可以达到75%.结论RA诱导ES-NT3细胞神经定向分化能够产生高比例神经细胞,提示其可以作为移植治疗神经损伤的供体. 相似文献