Fibulin-2在亚剂量血管紧张素Ⅱ诱导心室重塑中的作用及机制

背景与目的心肌重塑是导致心衰发生和发展的重要原因,近期多项研究提示心肌成纤维细胞参与和调节了心肌重塑的过程。Fibulin-2由心肌成纤维细胞分泌,是心肌间充质(ECM)的主要成员并在心肌形成初期高表达,但Fibulin-2是否参与心肌重塑的发病过程目前仍未见报道。方法正常(WT)和Fibulin-2基因敲除(Fbln2-/-)C57/BL小鼠,背部皮下植入微型渗透压泵(mini-osmotic-pump),处理组持续4周输注亚剂量血管紧张素Ⅱ[AngⅡ,0.2μg/(kg.min)],对照组输注相同剂量的生理盐水。结果对照组及处理组在实验过程中体重和血压无统计学差异,Fbln2-/-小鼠经AngⅡ处理后未检测到心肌重塑发生。然而,WT组小鼠在AngⅡ干预后左心室发生了显著心肌重塑(P<0.01),左心室重量体重比(HW/BW)为4.83±0.18mg/g比4.01±0.12 mg/g,左心室舒张期末后壁厚度(LVPWd)为0.76±0.05 mm比0.71±0.03 mm,HE染色心肌细胞横切面积为816.0±32.8μm2比574.8±24.4μm2;脑利尿钠肽(BNP)是心室重塑的敏感指标,Real-t...     

同型半胱氨酸通过诱导miR-33激活NF-κB途径上调RAW264.7源性泡沫细胞TNF-α、IL-6的表达

目的研究同型半胱氨酸(Hcy)是否通过诱导mi R-33激活核因子κB(NF-κB)途径上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的表达,促进炎症反应,加剧动脉粥样硬化(As)。方法 RAW 264.7源性巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导为泡沫细胞后,分别将mi R-33 mimics和mi R-33 inhibitor转染入细胞内后每组给予5.0 mmol/L的Hcy干预;油红"O"染色确定泡沫细胞模型是否诱导成功; Western blot和实时定量PCR测定NF-κB、TNF-α、IL-6的蛋白和m RNA表达;高效液相色谱检测细胞内胆固醇含量。结果油红"O"染色后含脂滴的泡沫细胞被染成红色;与其它组相比,mi R-33 mimics组的NF-κB、TNF-α、IL-6的蛋白和m RNA表达均增高且细胞内的胆固醇含量增加(P0.05); mi R-33 inhibitor组的NF-κB、TNF-α、IL-6的蛋白和m RNA表达均降低且细胞内的胆固醇含量降低(P0.05);空白对照组、mi R-33 mimics对照组和mi R-33 inhibitor对照组间相比,所有检测指标均无统计学差异(P0.05)。结论 Hcy通过诱导mi RNA-33激活NF-κB途径上调TNF-α和IL-6的表达,增加炎症反应,促进动脉粥样硬化。     

冠心病患者来源HDL对小鼠腹腔巨噬细胞脂质沉积及凋亡的影响

目的:探讨冠心病(CAD)患者来源的高密度脂蛋白(HDL)对小鼠腹腔巨噬细胞脂质沉积及凋亡的影响。方法:分离提取健康人群、稳定型冠心病(SCAD)及急性心肌梗死(AMI)患者的HDL,并观察其对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞内脂质沉积及细胞凋亡的影响。采用油红O检测细胞内脂质沉积,用DCFH-DA检测活性氧簇(ROS)的水平,annexin V/PI检测巨噬细胞凋亡率,Western blot检测巨噬细胞ATP结合盒转运体(ABC)A1、ABCG1、Bcl-2和Bax的表达。结果:ox-LDL处理后巨噬细胞脂质沉积增加, ABCA1和ABCG1表达上调(P<0.05);与单纯ox-LDL处理组相比,联合健康人HDL(HDL_healthy)处理后巨噬细胞脂质沉积减少,ABCA1和ABCG1表达上调(P<0.05),而联合SCAD患者HDL(HDL_SCAD)或AMI患者HDL(HDL_AMI)处理后巨噬细胞脂质沉积进一步增加,ABCA1和ABCG1表达下调(P<0.05);与HDL_...     

硫化氢对氧应激所致心肌细胞损伤的影响及机制

目的 探讨硫化氢供体硫氢化钠对过氧化氢诱导心肌细胞氧化应激损伤的保护机制.方法 采用胶原酶消化分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞.过氧化氢诱导建立氧化应激模型.经硫氢化钠和LY294002预处理探讨硫化氢对过氧化氢诱导心肌细胞损伤的保护作用,观察心肌细胞形态学变化,检测乳酸脱氢酶、丙二醛的含量和超氧化物歧化酶的活性,Western blot检测凋亡相关蛋白表达,流式细胞术检测心肌细胞的凋亡.结果 过氧化氢可引起乳鼠心肌细胞乳酸脱氢酶、丙二醛含量升高,Akt磷酸化水平下降,Bcl-2/Bad比值降低,细胞凋亡率升高(P＜0.05);硫氢化钠预处理能减轻过氧化氢引起的心肌细胞损伤,乳酸脱氢酶、丙二醛含量下降,Akt磷酸化水平升高,Bcl-2/Bad比值升高,细胞凋亡率下降(P＜0.05);PDK/Akt特异性阻断剂LY294002能部分减轻硫氢化钠的保护作用(P＜0.05).结论 硫氢化钠预处理能使Akt的磷酸化水平升高,Bcl-2/Bad比值升高,在一定程度上减轻过氧化氢诱导的心肌细胞损伤及凋亡,硫化氢可能通过激活PI3K/Akt信号转导通路发挥保护作用.     

miRNA-33对Hcy干预RAW264.7巨噬细胞衍生的泡沫细胞表达ABCA1/ABCG1的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)是否通过微小RNA-33 (miRNA-33)抑制三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)的表达,从而降低胆固醇逆转运(RCT)效率。方法:复制RAW264.7巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导为泡沫细胞的模型,油红O染色确定模型是否复制成功,用LipofectamineTM2000将miRNA-33 mimics和miRNA-33 inhibitor分别转染入细胞内,再给予5 mmol/L的Hcy干预24 h后进行实验;用油红O染色观察细胞内脂滴情况;real-time PCR和Western blot检测ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达水平;液体闪烁计数法检测细胞内胆固醇流出率;高效液相色谱分析细胞内胆固醇含量。结果:(1)与空白对照组相比,miRNA-33 mimics组细胞内脂滴含量增加,ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达量降低(P 0.05),细胞内胆固醇含量逐渐增加(P 0.05),细胞内胆固醇流出率逐渐减少(P 0.05);(2)与空白对照组相比,miRNA-33 inhibitor组检测结果与miRNA-33 mimics组的结果相反,差异具有统计学意义(P 0.05);(3)空白对照组、miRNA-33 mimics-NC组和miRNA-33 inhibitor-NC组3组间相比,所有检测结果的差异均无统计学显著性。结论:Hcy可间接通过诱导miRNA-33表达而抑制ABCA1和ABCG1的蛋白表达,降低RCT效率。     

Fibulin-2在亚剂量血管紧张素Ⅱ诱导心室重塑中的作用及机制

目的蛋白磷酸酶4(PP4)是白细胞介素6(IL-6)信号通路中新发现的调控因子。本文主要观察白细胞介素6诱导的肝脏胰岛素抵抗模型中PP4的表达及活性变化,并探讨PP4对白细胞介素6诱导的肝脏胰岛素抵抗模型中信号通路的影响。方法用白细胞介素6(10μg/L)刺激人肝癌细胞系HepG2细胞18 h,建立胰岛素抵抗模型。氧化酶法测HepG2细胞糖异生,应用蒽酮法测细胞内糖元合成;Western Blotting和定量PCR检测细胞内PP4的表达;免疫沉淀及磷酸酶活性分析检测PP4的活性;使用RNAi技术抑制PP4表达,并用Western Blotting检测胰岛素信号通路中一些关键蛋白,如IRS1、P-IRS1、JNK和P-JNK的表达。结果白细胞介素6刺激HepG2细胞后,导致HepG2细胞糖异生能力增强,细胞内糖元合成显著降低,出现明显胰岛素抵抗状态。Western Blotting和定量PCR结果均表明白细胞介素6刺激HepG2细胞后,PP4表达较正常组明显升高,且免疫沉淀及磷酸酶活性分析结果证明PP4活性也显著升高。同时,Western Blotting结果显示,白细胞介素6刺激后,IRS1表达下降,P-I...