骨肉瘤中O-GlcNAc糖基转移酶的表达及其对增殖和顺铂敏感性的影响

背景与目的：O-GlcNAc糖基转移酶（O-GlcNAc transferase,OGT）广泛参与肿瘤细胞的生物学行为,并与癌症的进展相关。分析骨肉瘤中OGT的表达水平,并观察其对骨肉瘤细胞增殖和顺铂敏感性的影响。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）、蛋白质印迹法（Western blot）及免疫组织化学法分析骨肉瘤组织中OGT的表达,并观察OGT的表达与临床病理学特点及与海南医学院第一附属医院收治的患者预后的关系。通过RNA干扰技术沉默骨肉瘤细胞中OGT的表达,通过细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）及5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU）分析其增殖情况。然后采用顺铂作用于骨肉瘤细胞,采用RTFQ-PCR及Western blot分析OGT mRNA及蛋白的表达情况。进一步改变骨肉瘤细胞中OGT的表达后加入顺铂,采用CCK-8及流式细胞术观察对顺铂的敏感性及骨肉瘤细胞的活力。结果：RTFQ-PCR、Western blot及免疫组织化学结果显示,骨肉瘤组织中OGT的表达水平显著提升（P<0.05）,OGT的表达与患者肿瘤直径的大小及病理学分期密切相关,且高表达的患者预后差（P<0.05）。沉默骨肉瘤细胞中OGT的表达后,其增殖能力明显减弱（P<0.05）,不同浓度的顺铂作用于骨肉瘤细胞后,OGT表达水平随着顺铂浓度的提升而提升。抑制骨肉瘤细胞中OGT的表达能够显著增强骨肉瘤细胞对顺铂的敏感性（P<0.05）,相反过表达OGT会导致顺铂耐受。结论：OGT在骨肉瘤组织中高表达,且与患者的预后密切相关,沉默OGT的表达可以抑制骨肉瘤的生长并增强对顺铂的敏感性,OGT可能是骨肉瘤靶向治疗的潜在生物标志物。     

TNF-α诱导MLO-Y4细胞发生RIP3介导的程序性坏死

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)能否诱导小鼠长骨骨样细胞株MLO-Y4发生程序性坏死及其发生机制。方法:将MLO-Y4细胞分为正常对照(control)组、TNF-α处理组、TNF-α+necrostatin-1(Nec-1)处理组、TNF-α+Z-VAD处理组和TNF-α+受体相互作用蛋白3(RIP3)-siRNA组。用流式细胞术检测各组细胞凋亡或坏死率,透射电镜鉴定细胞形态学变化,用Western blot法测定RIP1、RIP3和cleaved caspase-3的蛋白水平,应用激光共聚焦显微镜观察RIP1和RIP3蛋白的共表达,应用荧光标记法检测各组细胞活性氧(ROS)水平。结果:TNF-α诱导MLO-Y4细胞24 h,凋亡和坏死率明显高于control组(P0.01)。与TNF-α组相比,Nec-1、Z-VAD和RIP3-siRNA均能降低细胞的凋亡或坏死率(P0.01)。在TNF-α组可见大量坏死样细胞,在Z-VAD组仍可见到坏死样细胞,而在Nec-1和RIP3-siRNA组未见到坏死样细胞。Western blot实验结果显示Nec-1可有效抑制RIP1蛋白表达,而Z-VAD对RIP1和RIP3蛋白表达无影响,RIP3-siRNA可有效降低RIP3蛋白表达(P0.01)。与TNF-α组比较,Nec-1可有效降低RIP1-RIP3蛋白共表达阳性细胞百分率(P0.01),而Z-VAD对其无影响。与control组相比,TNF-α组的ROS水平明显增高(P0.01);与TNF-α组相比,Nec-1、Z-VAD及RIP3-siRNA均能有效抑制ROS水平(P0.01)。结论:TNF-α能诱导MLO-Y4细胞发生RIP3介导的程序性坏死;ROS可能是MLO-Y4细胞程序性坏死的执行者。     

高速磨钻辅助下椎弓根钉棒系统治疗颈椎交锁性脱位

目的 探讨应用高速磨钻辅助下颈椎椎弓根钉棒系统治疗下颈椎交锁性脱位的适应证、方法及疗效. 方法 回顾性分析2006年12月-2011年7月应用高速磨钻辅助椎弓根钉棒系统复位固定治疗的13例颈椎交锁性脱位患者临床资料.脱位部位:C3/43例,C4/55例,C55/64例,C6/71例.致伤原因:交通伤7例,高处坠落伤6例.2例无任何神经症状,7例合并中央管损伤综合征,4例截瘫.13例患者均在伤后7d内行高速磨钻辅助后路椎弓根螺钉复位内固定术,采用短节段固定,椎弓根钉置入上下相邻的椎弓根内,在复位撑开钳的配合下解除小关节交锁,并复位固定. 结果 所有患者均获良好复位,13例患者中8例解剖结构完全复位,5例有1～2 mm轻度滑脱.共置入52枚椎弓根螺钉,术中未出现脊髓、神经根或椎动脉损伤,术后X线片及CT显示除3枚螺钉偏移出椎弓根外,其余49枚螺钉完全位于椎弓根内.随访12-36个月,术后上肢感觉、运动功能明显改善.1例术后3个月断钉,但无神经症状. 结论 高速磨钻辅助椎弓根钉棒复位内固定适用于治疗颈椎交锁性脱位,复位过程符合生物力学,同时可行减压治疗.     

雌激素缺乏上调TNF-α促发卵巢切除大鼠骨细胞程序性坏死

目的探讨雌激素缺乏对去卵巢骨质疏松大鼠骨细胞程序性坏死的影响及其发生机制。方法 60只雌性SD大鼠随机分为Control组(12只)和OVX组(48只),分别行假手术或OVX术;再将48只OVX大鼠分为OVX+vehicle、OVX+Nec-1、OVX+Z-VAD和OVX+E2组,每组12只。Micro-CT扫描评价胫骨近端骨量改变;免疫组化法测定骨细胞TNF-α、RIP1、RIP3的表达情况,并计算各组阳性细胞百分率;用透射电镜鉴定细胞形态学变化;Western blot检测程序性坏死下游信号通路蛋白MLKL、Drp1的表达情况。结果 OVX+vehicle组大鼠胫骨近端出现明显的骨量丢失,即OVX+vehicle组Tb.Th、BV/TV、Tb.N小于Control组(P0.01);而OVX+vehicle组Tb.Sp大于Control组(P0.01)。TNF-α、RIP1、RIP3蛋白在骨细胞胞浆中均有表达;在OVX+vehicle组,TNF-α、RIP1、RIP3阳性骨细胞百分率较Control组显著增多(P0.01),在OVX+vehicle组可见大量坏死样结构的骨细胞。应用Nec-1治疗后可有效抑制RIP1蛋白表达,而Z-VAD对RIP1、RIP3蛋白表达无影响,在OVX+Nec-1组未见到坏死样结构的骨细胞。在OVX+vehicle组,Western blot结果显示MLKL、Drp1蛋白表达较Control组显著增多(P0.01),应用Nec-1治疗后可有效抑制MLKL、Drp1蛋白表达,而Z-VAD对MLKL、Drp1蛋白表达无影响。结论雌激素缺乏可能是通过上调TNF-α表达而促发骨细胞发生程序性坏死的,MLKL、Drp1可能是骨细胞程序性坏死的下游关键信号分子。