G17-白喉毒素嵌合蛋白的表达、纯化和免疫原性初步研究

目的  构建胃泌素多肽G17-白喉毒素A亚单位（diphtheria toxin subunit A,DTA）嵌合蛋白,并初步研究其免疫原性。方法  用酶切法将编码G17的基因与DTA基因连接后,插入载体pET11C,并在大肠埃希菌BL21中表达。先后用阴离子交换色谱法和分子排阻色谱法对表达的目的蛋白进行纯化。用纯化的G17-DTA免疫NIH小鼠,并用ELISA检测小鼠抗G17抗体。结果  构建的G17-DTA嵌合蛋白可在大肠埃希菌中高效表达,表达量达0.5~0.6 mg/ml菌液。经2次纯化后,G17-DTA的纯度可达95%。纯化的G17-DTA在小鼠中诱生了抗G17抗体。结论  构建的G17-DTA嵌合蛋白能在大肠埃希菌中表达,而且在小鼠中具有免疫原性。     

阻断型抗人IgE单克隆抗体的制备及其表位分析

目的 利用基因重组抗原免疫小鼠,制备抗人IgE单克隆抗体,研究其特异性和功能.方法 用表达的重组人IgE-Fc免疫BLAB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,以间接ELISA法筛选杂交瘤上清.用ELISA阻断分析鉴定其生物学功能;通过丙氨酸突变扫描分析确定其抗原表位.结果 利用杂交瘤技术获得了1株抗人IgE的单克隆抗体178,它具有IgE抗体特异性反应,其识别的抗原表位位于IgE与其受体结合的关键部位.经鉴定其具有体外阻断IgE与其受体结合的活性.结论 利用基因重组抗原制备了1株抗人IgE的单克隆抗体178,此单克隆抗体具有体外阻断IgE与其受体结合的生物活性.     

抗HER3单克隆抗体的人源化及成药性初步评价

目的构建人源化抗人表皮生长因子受体3(human epidermal growth factor receptor 3, HER3)单克隆抗体(单抗)并对其成药性进行初步评估。方法通过互补决定区(complementarity-determining region, CDR)移植对鼠抗HER3单抗进行人源化, 然后对骨架区一些位点氨基酸进行回复突变以恢复人源化抗体的亲和力。对重组表达的人源化抗体用聚乙二醇沉淀法检测其在不同缓冲液中的溶解度, 并通过测定内源荧光评估其高级结构。结果经CDR移植及回复突变的抗HER3人源化抗体具有与嵌合抗体相当的亲和力, 且人源化抗体具有较好的溶解度及典型的抗体内源荧光特性。结论成功人源化了鼠抗HER3单抗, 人源化后的抗体具有开发成临床药物的潜力。