肿瘤坏死因子新型免疫抑制剂的构建、表达和鉴定

目的 用鸡卵清溶菌酶(Hen egg-white lysozyme，HEL)T辅助细胞表位序列替换hTNF-α3^ 末端序列，构建和表达hTNF-α新型免疫抑制剂。方法 将重组的hTNF-α HEL克隆、表达、纯化后进行初步的生物学活性鉴定。结果 DNA测序分析表明，重组的hTNF-α HEL3^ 末端序列与设计序列完全相同。将其插入pBV220表达载体中，重组菌经42℃诱导4h做SDS-PAGE分析，结果 显示该免疫抑制剂获得了表达，Mt为17000，其表达量为菌体总蛋白量的30％。Western blot结果证实，该表达蛋白可与抗TNF-α抗体产生免疫反应。对该表达蛋白进行了阴离子交换柱纯化，获得的重组蛋白的纯度可达95％以上。对该蛋白的体外杀伤活性检测表明，该蛋白已完全丧失了TNF-α的体外杀伤活性。结论 上述实验结果证明，TNF-α免疫抑制剂的构建获得了成功，该免疫抑制剂既保持了与TNF-α抗体结合的能力又失去了TNF-α的杀伤活性，为其下一步治疗作用的研究奠定了基础。     

新型肿瘤坏死因子免疫抑制剂的克隆和表达

目的：用鸡卵清溶菌酶（hen egg-white lysozyme,HEL)T辅助细胞表位序列替换新型rhTNF—α3’末端序列，构建和表达新型rhTNF-α免疫抑制剂。方法：克隆、表达、纯化和鉴定新型rhTNF-α免疫抑制剂。结果：DNA测序表明，重组新型hTNF—αHEL的3’末端序列与设计序列完全相同。将其转移到pBV220表达载体中，重组菌经42℃诱导后做SDS—PACE分析，结果显示该重组体获得了表达，其表达量为菌体总蛋白量的30％，表达形式为包涵体，对该包涵体进行溶解和复性，再经阴离子交换柱纯化，获得的重组蛋白的纯度可达90％以上。免疫印迹鉴定结果证实，该表达蛋白可与抗TNF—α抗体产生免疫反应。体外杀伤活性检测显示，该蛋白已完全丧失了新型TNF—α的体外杀伤活性。结论：上述实验证实，新型rhTNF—α免疫抑制剂构建成功，该免疫抑制剂既保持了与TNF—α抗体结合的能力又失去了TNF-α的杀伤活性，为其下一步治疗作用的研究打下了基础。