重组金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素对人肺泡巨噬细胞细胞因子表达的影响

目的 应用体外培养人肺泡巨噬细胞(AM),观察重组金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素(rPVL)对AM的CD14白细胞介素(IL)-10及肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响.方法 从患者BALF中分离纯化AM,根据作用时间及rPVL浓度不同分为T0N0组[T为时间(h),N为毒素浓度(nmol/L)]、T6N0组、T6N10组、T6N100组、T24N0组、T24N10组、T24N100组共7组.半定量逆转录PCR法测定AM的CD14mRNA水平,双抗夹心ELISA法测定AM培养液上清IL-10及TNF-α浓度.结果 rPVL作用后AM的CD14mRNA下降,降低幅度随时间延长和毒素浓度升高而增加.3组空白对照组间差异无统计学意义(F=1.708,P>0.05).T6N10、T6N100组均较T6 N0组低(t=4.132、6.818,均P<0.001);T6N10、T24N100组均较T24N0组低(t=7.401、11.415,均P<0.001),表明毒素作用后CD14表达量降低.T24N10组低于T6N10组、T24N100组低于T6N100组(t=4.692、6.019,均P<0.001),表明毒素作用后CD14mRNA随时间延长而降低.T6N100组低于T6N10组、T24N100组低于T24N10组(t=2.686、4.014,均P<0.05),表明CD14mRNA随毒素浓度升高而降低.IL-10浓度T24N10、T24N100组均高于T24N0组(t=4.036、3.941,均P<0.01),表明IL-10的释放随毒素浓度增加和作用时间延长而增加.TNF-α浓度T24N10组低于T24N0组,而T24N100组高于T24N0组(t=2.824、8.468,均P<0.01),表明低浓度毒素可抑制TNF-α释放而高浓度毒素诱导其大量释放.结论 rPVL致AM的CD14表达下降并致AM促炎和抗炎因子表达异常,可致AM功能缺陷引起宿主免疫抑制,不利于炎性细胞对病原菌的清除,可能是杀白细胞毒素金黄色葡萄球菌感染,尤其是重症坏死性肺炎病死率高的重要原因之一.     

重组金黄葡萄球菌杀白细胞毒素体外对人肺泡巨噬细胞Toll样受体2表达的影响

金黄葡萄球菌杀白细胞毒素(panton-valentine leukocidin,PVL)是致病性金黄葡萄球菌产生的一种特异作用于中性粒细胞与单核/巨噬细胞的外毒素,是坏死性肺炎的重要毒力因子.我们用荧光定量PCR法观察重组PVL(rPVL)对人肺泡巨噬细胞Toll样受体(TLR)2表达的影响.     

NLRP3炎症小体在甲型流感病毒和MRSA致小鼠肺炎早期的作用差异

目的 探讨NLRP3炎症小体在甲型流感病毒H1N1(甲流病毒H1N1)及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)所致肺炎早期的作用。方法 分别以甲流病毒H1N1/FM1株与MRSA滴鼻感染C57BL/6小鼠各5只,引起甲流病毒肺炎与MRSA肺炎,感染24 h后,观察肺组织病理,荧光定量PCR检测各组小鼠肺组织NLRP3蛋白、IL-1β的mRNA表达强度,蛋白免疫印迹法检测小鼠肺组织NLRP3蛋白相对表达量,ELISA检测小鼠血清IL-1β的浓度。结果 NLRP3蛋白的mRNA表达水平及蛋白表达水平各组间比较差异有统计意义(F_mRNA=38.782和F_蛋白=1 325.64,P均为0.000),IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度各组间比较差异有统计学意义(F_mRNA=1 253.97和F_血清=41.974,P均为0.000)。H1N1组 NLRP3蛋白的mRNA表达水平及蛋白表达水平均高于空白对照组(P均<0.05),IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均高于空白对照组(P均<0.01)。MRSA组NLRP3蛋白的mRNA表达水平高于空白对照组(P<0.05),蛋白表达水平与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),MRSA组IL-1β的mRNA表达及血清浓度均高于空白对照组(P均<0.01)。H1N1组 NLRP3蛋白的mRNA表达水平及蛋白表达水平均高于MRSA组(P均<0.05),但MRSA组IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显高于H1N1组(P均<0.01),与肺组织病理变化相一致。结论 在甲流病毒性肺炎及MRSA肺炎早期,NLRP3炎症小体介导甲流病毒引起的炎症反应,但并没有在MRSA引起的剧烈炎症反应中起重要作用。     

MUC1 mRNA体外负载树突状细胞诱导细胞毒性T细胞对非小细胞肺癌的杀伤作用

 目的：将体外扩增的黏蛋白1 （MUC1） mRNA转染入成熟的树突状细胞（DCs）,观察其体外诱导的特异性抗肿瘤效应。方法：将分离提纯的单核细胞培养诱导为DC并用流式细胞术鉴定。构建pcDNA3.1（+）-MUC1质粒,体外转录为mRNA,电穿孔法转染DCs。定量 PCR检测转染的DCs中MUC1的表达;MTT法检测T细胞增殖情况;流式细胞术检测CD8+ 在T细胞的表达;LDH释放法测定细胞毒性,ELISA检测IFN-γ分泌水平。结果：流式细胞术结果表明成熟DCs标志表型的表达明显高于对照组。定量PCR结果说明转染后的DCs MUC1 mRNA相对表达量增高。转染组DCs与T细胞按1∶10共培养时,刺激增殖能力明显高于未转染组,且CD8+  T细胞表达率高于未转染组,诱导产生特异性的细胞毒性T细胞杀伤表达MUC1蛋白的靶细胞,而未转染组的杀伤作用较弱。转染组DCs与T细胞共培养的上清中IFN-γ的分泌水平高于未转染组。结论：电穿孔法可以将MUC1 mRNA成功转染至DCs,产生特异性杀伤效应,为以MUC1为靶点的非小细胞肺癌的免疫治疗提供实验和理论依据。     

34例组织细胞坏死性淋巴结炎器官受累分析

目的探讨组织细胞坏死性淋巴结炎(HNL)的器官受累情况及治疗、预后,以提高对本病的认识。方法收集1997年7月至2013年6月中山大学附属第三医院收治的34例HNL病例的临床资料,总结其器官受累特点、治疗与预后。结果 HNL可累及多个器官。34例患者均有淋巴结受累,血液受累者占67.6%(23/34),累及皮肤者占23.5%(8/34),累及肺脏者占14.7%(5/34),累及浆膜腔者占11.8%(4/34),累及脑膜者占5.9%(2/34),累及关节占2.9%(1/34)。同时累及3个及以上器官者32.3%(11/34),定义为多器官受累,激素治疗起始剂量比非多器官受累组大(t=3.126,P0.05),激素治疗时间亦较长(t=2.446,P0.05)。两组住院时间分别为(16.2±8.7)和(14.0±5.3)d,差异无统计学意义(t=0.751,P=0.465)。结论 HNL激素治疗有效,多器官受累患者激素治疗起始剂量较大、时间较长。     

组织细胞坏死性淋巴结炎临床特点分析

目的：总结组织细胞坏死性淋巴结炎（ HNL）的临床特点。方法收集1997年至2012年中山大学附属第三医院收治的32例HNL病例的临床资料,总结其人群学特征、症状与体征、实验室与病理活组织检查（活检）结果、治疗与转归。结果 HNL多见于年轻人,其中儿童2例;男女比例1∶1.46。32例均有淋巴结肿大与发热,其中高热患者占78％（25/31）,伴皮疹者占25％（8/32）。白细胞降低者占66％（21/32）, CRP升高者占63％（12/19）, ESR 增快者占67％（18/27）,乳酸脱氢酶增高者占92％（22/24）,抗核抗体阳性者占40％（8/20）。巨细胞病毒抗体阳性1例（1/5）。淋巴结活检可见典型病理学改变。其中93.8％患者接受抗生素治疗,53.1％患者应用糖皮质激素（激素）治疗。32例患者均治愈,复发1例。结论 HNL 临床少见,表现缺乏特异性,确诊依赖病理检查,激素治疗有效,预后良好,但应及时病理确诊以避免抗生素的过度使用。     

关于防控疫情一线科室医护人员在2019新型冠状病毒感染的肺炎救治工作中的体会与建议

2019新型冠状病毒(2019-nCoV)的出现及迅速传播给人类健康及全球公共卫生安全带来极大的危害及挑战。呼吸与危重症医学科、急诊科、感染性疾病科等是防控疫情一线科室,这些科室医护人员是发热门诊、隔离病房及ICU的主要力量。该文对2019-nCoV感染的肺炎发病机制及临床表现进行概述,介绍2019-nCoV感染的肺炎救治工作中的体会,重点描述医护人员的个人防护与救治患者、救治重症患者中的支持治疗与抗感染治疗,并提出相关建议。     

肺部受累是重症登革热的早期线索

【目的】分析肺部受累与重症登革热（SD）的关系,以提高对SD的早期识别。【方法】回顾分析2014年7月至2018年10月中山大学附属第三医院收治的227例登革热病例资料,分析其临床特点、实验室与影像学资料、治疗及预后,探索肺部受累与SD的关系。【结果】老年、吸烟、高血压、糖尿病、脑血管病者在登革热肺部受累组明显高于肺部未受累组（χ2=25.146、3.847、10.326、7.177和5.355,P=0.000、0.050、0.001、0.007和0.021）。咳嗽、气促发生率在肺部受累组明显增高（χ2=11.465、6.068;P=0.001、0.014）,在SD亚组也明显高于普通登革热亚组（χ2=4.585、6.717;P=0.032、0.010）。肺部受累组C反应蛋白及降钙素原增高（Z=-2.591、-3.033;P=0.010、0.002）。胸腔积液在SD亚组发生率高（χ2=4.987,P=0.026）,双肺炎性渗出与SD有相关性（χ2=5.910,P=0.015）。肺部受累组易并发急性肝、肾功能损害及多器官功能障碍综合征（MODS）（χ2=7.044、7.059、11.315,P=0.008、0.008、0.001）。肺部受累组抗病毒、抗细菌及两者联合用药的比例均明显高于肺部未受累组（χ2分别为13.156、32.845与12.684,P均<0.001）。【结论】老年、吸烟、高血压、糖尿病、脑血管病登革热患者易并发肺部受累,咳嗽、气促、胸腔积液及双肺炎性渗出等肺部受累情况在SD中比例增高,应关注这些表现的登革热病例进展至SD的风险。     

NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒感染继发MRSA肺炎中的表达变化

目的:探索NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒(甲流病毒)HIN1感染继发耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)肺炎中的表达变化。方法:选取C57BL/6小鼠15只,分为空白对照组、MRSA组(MRSA滴鼻感染24 h)和H1N1+MRSA组(甲流病毒H1N1滴鼻预感染6 d后联合MRSA滴鼻感染24 h)。检测小鼠肺组织NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,并检测白细胞介素1β(IL-1β)在肺组织中的mRNA水平及在血清中的浓度。观察小鼠肺组织病理并分析小鼠IL-1β血清浓度与体重下降率的相关性。结果:MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平与空白对照组比均无明显差异(P>0.05),但IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显高于空白对照组(P <0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3、caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,及IL-1β的mRNA表达水平和血清浓度均明显高于空白对照组(P <0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于MRSA组(P <0...