桑色素对视网膜母细胞瘤生长和凋亡的影响

探讨桑色素对人视网膜母细胞瘤细胞增生抑制及诱导凋亡的作用。设计 实验研究。研究对象 人视网膜母细胞瘤细胞Y79细胞。方法 不同浓度（0、50、100、150、250 μM）桑色素对人视网膜母细胞瘤细胞Y79细胞作用24、48、72小时后,CCK8法检测肿瘤细胞生存率的变化;细胞周期检查法检测肿瘤细胞周期的变化;用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡的变化。主要指标 细胞生存率、细胞周期分布、细胞凋亡率。结果 桑色素浓度为150、250 μM,与桑色素浓度为0、50、100 μM作用于Y79细胞相比,检测时间分别在48、72小时时的细胞生存率显著下降（P＜0.05）,细胞周期G0-G1期显著增多（P＜0.05）,S期显著下降（P＜0.05）,细胞凋亡显著增多（P＜0.05）。较高浓度的桑色素,随着作用时间的延长,引起Y79细胞生存率逐渐下降,细胞凋亡率逐渐增多,具有时间依赖性和剂量依赖性。结论 桑色素能够抑制视网膜母细胞瘤增生并促进其凋亡,提示桑色素有望成为治疗视网膜母细胞瘤的有效药物。     

microRNA-125b对人视网膜母细胞瘤多药耐药性影响的实验研究

目的 探讨microRNA-125b（miR-125b）在人视网膜母细胞瘤细胞中多药耐药的作用及其机制。设计 实验研究。 研究对象 人视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞。方法 用RT-PCR方法检测miR-125b视网膜母细胞瘤细胞株SO-RB50和耐药细胞株SO-Rb50/VCR中的表达变化;化学合成的miR-125b过表达（miR-125mimic 组）和抑制载体（miR-125inhibitor组）转染SO-Rb50细胞株,用MTT法和Annexin V-FITC法检测在药物长春新碱、依托泊苷和卡铂,依次作用上述转染细胞后,细胞增生力和细胞凋亡的变化;用蛋白印迹法检测miR-125b过表达和抑制表达后细胞株SO-RB50中 MAGE-A/P53蛋白的表达变化。主要指标 细胞存活率和细胞凋亡率。结果 SO-Rb50/VCR组与SO-RB50组相比,miR-125b的表达显著增高（P=0.002）;长春新碱、依托泊苷和卡铂依次作用于转染后的SO-RB50细胞株后,miR-125mimic组与miR-125inhibitor组相比,细胞存活率显著增高（P=0.000）,细胞凋亡率显著下降（P=0.000）,P53蛋白表达水平显著下降（P=0.001）,MAGE-A蛋白表达水平显著增高（P=0.004）。结论 在SO-RB50细胞中,下调miR-125b后提高肿瘤细胞对化疗药物敏感性,且miR-125b可能是通过MAGE-A/P53通路调控视网膜母细胞瘤多药耐药性。     

PAX6基因及其下游促分化基因在视网膜母细胞瘤分化过程中的作用

 目的 检测在视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,RB）中,眼发育调控基因PAX6及其下游促分化基因MATH5和BRN3b在蛋白水平的表达情况,从而探讨PAX6基因在RB分化过程中的作用。 设计 病例对照研究。研究对象 新鲜RB组织10例,正常视网膜组织10例。方法  实验组：RB组织;对照组：正常视网膜组织。采用WesternBlot法检测新鲜视网膜母细胞瘤组织和正常视网膜组织中Pax6、Math5、Brn3b蛋白质水平的表达情况并作比较。主要指标 Pax6、Math5、Brn3b蛋白质的表达水平。结果 本研究中RB组织和正常视网膜组织中均可检测出Pax6、Math5、Brn3b蛋白的表达。与正常视网膜组织相比较,RB组织中Pax6、Math5、Brn3b蛋白的表达水平增高（P均<0.001）;Math5与Pax6蛋白表达具有线性相关性（r=0.949, P<0.001）, Brn3b与Math5蛋白表达具有线性相关性（r=0.927, P<0.001）。结论 在RB组织中, PAX6基因上调下游促分化基因MATH5和BRN3b表达水平,促进RB组织的分化。     

视交叉后段视路疾病的眼部表现分析

视路是指从视网膜神经纤维层起,到大脑枕叶皮质纹状区的视觉中枢为止的整个有关视觉的神经传导的经路.     

特发性黄斑前膜手术前后嵌合体带改变与视功能的相关性

目的:探讨特发性黄斑前膜(IMEM)患者手术前后黄斑区微结构与术后视功能恢复的相关性。方法:选取2017-01/2019-12就诊于我院的IMEM患者43例43眼,术前、术后3、6、9mo均检测最佳矫正视力(BCVA),进行视物变形(M-chart评分表)评分,并采用频域光学相干断层扫描(SD-OCT)测量中心凹视网膜厚度(CFT)、中心凹下脉络膜厚度(SFCT)、神经节细胞-内丛状层(GC-IPL)厚度及嵌合体(IZ)带缺损长度。结果:术后3、6、9mo,纳入患者BCVA和视物变形程度均较术前逐渐改善(均P<0.05),且BCVA与CFT、IZ带缺损长度均呈正相关(P<0.05),与SFCT、GC-IPL厚度均无相关性(P>0.05);视物变形评分与CFT均呈正相关(P<0.05),与SFCT、GC-IPL厚度、IZ带缺损长度均无相关性(P>0.05)。结论:CFT和IZ带缺损长度与IMEM术后BCVA具有显著相关性,这两项指标可作为预测IMEM术后视功能恢复的指标。     

潜伏转化生长因子β结合蛋白2(LTBP2)对氧化型低密度脂蛋白诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响

目的 探索潜伏转化生长因子 β结合蛋白2(LTBP2)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人视网膜色素上皮(ARPE)细胞氧化损伤的影响.方法 0 mg·L-1、50 mg·L-1、100 mg·L-1和200 mg·L-1 ox-LDL处理ARPE-19细胞,CCK-8试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒检测细胞活力和凋...     

miR-29b激活自噬抑制人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的　研究miR-29b激活自噬抑制人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞增殖的作用。方法　通过病毒颗粒包装转染RPE细胞24~72 h，在倒置荧光显微镜下观察荧光强度检测感染效率，利用实时定量PCR检测miR-29b mRNA表达。采用凝血酶刺激RPE细胞增殖模拟增生性玻璃体视网膜病变模型。使用0.5×10³ U·L^-1凝血酶预刺激1 h，然后分别加入miR-29b和Lenti-vector空载体刺激24 h。分为空白对照组（Sham组）、凝血酶刺激组（RPE组）、凝血酶刺激组+miR-29b过表达组（RPE+Lenti-29b组）、凝血酶刺激组+空载体组（RPE+Lenti-vector组）。利用MTT微量酶比色法检测各组RPE细胞增殖情况，Western blot观察微管相关蛋白1轻链3（light chain 3,LC3）Ⅱ表达变化。结果　在倒置荧光显微镜下观察发现，RPE+Lenti-29b组和RPE+Lenti-vector组90%以上的RPE细胞成功转染，且RPE+Lenti-29b组miR-29 mRNA水平高表达，与其余3组相比差异均有统计学意义（均为P<0.01）。与Sham组比较，其余3组RPE细胞增殖明显，差异均有统计学意义（均为P<0.05），LC3Ⅱ蛋白表达也明显升高，差异均有统计学意义（均为P<0.05）；与RPE+Lenti-29b组比较，RPE组和RPE+Lenti-vector组细胞增殖明显（均为P<0.05），但LC3Ⅱ蛋白表达明显低于RPE+Lenti-29b组，差异有统计学意义（P<0.01）。结论　上调miR-29b表达可激活RPE细胞中LC3Ⅱ蛋白表达，提高细胞自噬水平，抑制RPE细胞增殖，可能在增生性玻璃体视网膜病变发生及发展中扮演重要作用。     

microRNA对人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞多药耐药性的影响

目的通过对人视网膜母细胞瘤（RB）肿瘤干细胞（CSCs）多药耐药性的研究,探讨microRNA对肿瘤干细胞多药耐药性的影响。方法通过流式细胞仪分选Y79细胞中的ABCG2（＋）与ABCG2（-）细胞,作为ABCG2（＋）组与ABCG2（-）组;采用MTT比色实验比较ABCG2（＋）组与ABCG2（-）组对抗肿瘤药物长春新碱、依托泊苷和卡铂的敏感性,得到候选microRNA。从标本库中选择RB组织切片,行LNA-原位杂交,并根据耐药性分为高耐药性组与低耐药性组,通过Real time PCR观察候选microRNA在两组中表达差异。结果 1分选阳性率：ABCG2（＋）分选后（91.7%）显著高于分选前（5.7%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。2两组耐药性比较：从各个浓度水平上比较,ABCG2（＋）细胞的耐药性明显高于ABCG2（-）细胞,差异有统计学意义（P〈0.05）。3分选细胞的凋亡率和细胞内药物蓄积比较：ABCG2（＋）组的凋亡率明显低于ABCG2（-）组,差异有统计学意义（P〈0.05）;ABCG2（＋）组的药物蓄积明显低于ABCG2（-）组,差异有统计学意义（P〈0.05）。4候选microRNA在不同耐药性RB切片中的表达：高耐药组的microRNA表达率（39.3%）明显高于低耐药组的microRNA表达率低（5.2%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ABCG2（＋）是Y79细胞系中的耐药细胞群,microRNA与肿瘤干细胞的侵袭性和耐药性密切相关,调控microRNA可以抑制肿瘤干细胞的耐药性,提高其对化疗的敏感性。     

视网膜母细胞瘤PAX6、Ki-67和MMP-9的表达及其与组织病理学的关系

目的 检测PAX6、Ki-67及MMP-9在视网膜母细胞瘤（RB）中的表达,探讨其与RB临床组织病理学特征之间的关系及临床意义。设计实验性研究。研究对象石蜡包埋RB组织40例,其中〈3岁组27例,≥3岁组13例。方法 采用免疫组织化学Elivision法检测PAX6、Ki-67及MMP-9在40例RB组织中的表达情况,分析该3种蛋白表达与患者性别、眼别、年龄、视神经受侵情况以及是否化疗等临床组织病理学特征的关系,并分析3种蛋白表达之间的相关性。主要指标RB组织中PAX6、Ki-67、MMP-9的表达及临床组织病理学特征。结果 40例RB组织中,PAX6、Ki-67及MMP-9的阳性表达率分别为52.5%、55.0%、57.5%。Ki-67在年龄大于3岁组的阳性表达率高于年龄小于3岁组（χ^2=6.825,P=0.016）,PAX6（χ^2=0.631,P=0.511）及MMP-9（χ^2=0.129,P=1.000）的表达与年龄无显著相关性。3种蛋白的表达均与性别及眼别无显著相关性。PAX6、Ki-67及MMP-9在球后视神经受侵袭组的阳性表达率均高于未受侵袭组（χ^2=14.401,P=0.017;χ^2=11.831,P=0.046;χ^2=13.961,P=0.038）。PAX6及Ki-67在未化疗组的阳性表达率均高于化疗组（χ^2=8.120,P=0.010;χ^2=6.465,P=0.025）。PAX6和Ki-67的表达呈正相关（r=0.347,P=0.028）。结论 PAX6的高表达促进了RB细胞的增生;PAX6、Ki-67和MMP-9的高表达与RB的侵袭有一定的相关性;化疗对RB中PAX6和Ki-67的表达有一定的抑制作用,在一定程度上可以降低RB侵袭转移的风险。     

自体游离内界膜移植术治疗玻璃体切割联合内界膜剥除术后未闭合黄斑裂孔患者的临床疗效

目的　评价自体游离内界膜移植术治疗玻璃体切割联合内界膜剥除术后未闭合黄斑裂孔患者的临床疗效。方法　本研究为回顾性病例研究。收集2016年3月至2018年6月14例（14眼）玻璃体切割联合内界膜剥除术后未闭合黄斑裂孔患者，行自体游离单层内界膜移植术，将黄斑区外残留的内界膜剥除一片略大于黄斑裂孔直径的游离植片，放置于黄斑裂孔中，并将植片边缘置于裂孔边缘下，起到固定作用，然后行气液交换，术后严格俯卧位3～5 d。术前，术后1 d、2周、1个月、3个月通过频域光学相干断层扫描图像观察黄斑裂孔直径及是否闭合，记录患者最佳矫正视力（best corrected visual acuity，BCVA）和眼压。结果　术后3个月，13眼黄斑裂孔完全闭合，裂孔闭合率为92.9%；1眼黄斑裂孔直径较术前明显缩小，裂孔周围视网膜贴附良好，但黄斑中心凹可见裸露的RPE层，未见神经上皮层组织。术后各时间BCVA较术前明显提高，差异均有统计学意义（均为P<0.05），其中11眼较术前提高，3眼无变化，但所有患者自诉视物变形症状较术前明显好转。术后2周，仅有1眼眼压高，为33.4 mmHg（1 kPa=7.5 mmHg），给予降眼压滴眼液后恢复正常。术后2周所有患者气体均完全吸收。14眼均未出现手术相关并发症。结论　自体游离内界膜移植术治疗玻璃体切割联合内界膜剥除术后未闭合黄斑裂孔，术后裂孔闭合率高，患者视功能改善明显。