TGF-β2刺激人Tenon囊成纤维细胞生物学行为改变及表达整合素连接激酶(ILK)的研究

目的 探讨转化生长因子β2(transforming growth factor beta 2,TGF-β2)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞(human Tenon fibroblasts,HTFs)生物学行为及表达整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的影响.方法 组织块贴壁法培养原代HTFs,免疫荧光染色鉴定波形蛋白和角蛋白.MTT法检测不同浓度TGF-β2对HTFs细胞的促增殖作用,RT-PCR检测TGF-β2作用前后α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)、ILK mRNA的表达,Western Blot检测α-SMA、ILK、E-cadherin蛋白的表达,细胞免疫荧光染色检测α-SMA、E-cadherin蛋白的表达.结果 MTT检测结果显示,TGF-β2作用48 h、72 h,5.0 μg· L-1及10.0 μg· L-1诱导下的OD值显著高于0.1μg·L-1、1.0 μg·L-1组及空白对照组(均为P＜O.05),5.0 μg·L-1及10.0 μg·L-1作用48 h及72 h的OD值显著高于24 h(均为P＜0.05).RT-PCR检测结果显示,5.0μg·L-1TGF-β2诱导48 h后,α-SMA mRNA及ILK mRNA水平和空白对照组相比明显上调,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).Western Blot检测结果显示,ILK、α-SMA及E-cadherin在空白对照组和5.0 μg· L-1TGF-β2处理组均有表达,但TGF-β2能够明显上调三者的表达,5.0 μg·L-TGF-β2处理48 h组与空白对照组差异均有统计学意义(均为P＜0.05).细胞免疫荧光染色结果显示,TGF-β2处理组α-SMA、E-cadherin均有荧光表达,其中oα-SMA表达在细胞质中,而E-cadherin在细胞质和细胞核中均有表达.结论TGF-β2可以诱导体外培养HTFs增殖,转分化及黏附性增强,同时促进ILK的高表达,提示ILK在青光眼术后瘢痕化过程中可能也起到一定作用.     

藏红花素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　观察大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI）时藏红花素对视网膜细胞凋亡数目、凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响，探讨缺血再灌注时藏红花素对视网膜的保护作用机制。方法　选取体质量200~250 g的健康雄性SD大鼠24只，随机分为4组:对照组、模型组、藏红花素低剂量组和藏红花素高剂量组，每组6只。藏红花素低剂量组、高剂量组分别于造模前3 d、30 min定时腹腔注射5 g·L^-1藏红花素5 mg·kg^-1、50 mg·kg^-1。造模成功后24 h处死大鼠并摘取眼球。使用电镜观察各组大鼠视网膜细胞结构，TUNEL染色检测视网膜凋亡细胞数量，免疫组织化学染色法观察凋亡相关蛋白Caspase-3在视网膜中的表达。结果　视网膜TUNEL染色发现，对照组视网膜组织中几乎未发现凋亡细胞的阳性表达，模型组视网膜神经节细胞层和内核层中发现大量棕黄色着色的细胞，其凋亡细胞数为（27.40±0.96）个，藏红花素低剂量组可见神经节细胞层、内核层凋亡细胞数较模型组减少，凋亡细胞数为（8.40±0.41）个，与模型组相比差异有统计学意义（P<0.01）；藏红花素高剂量组凋亡细胞数较模型组和低剂量组明显减少，凋亡细胞数为（4.30±0.47）个，和藏红花素低剂量组相比差异有统计学意义（P<0.01）。对照组大鼠视网膜组织Caspase-3染色阴性，模型组视网膜神经节细胞层可见棕黄色颗粒位于细胞浆内，藏红花素低剂量组Caspase-3蛋白表达量与模型组类似，藏红花素高剂量组Caspase-3蛋白表达量与对照组类似。结论　藏红花素能通过降低Caspase-3蛋白含量及凋亡细胞数，从而有效保护视网膜免受RIRI。     

糖尿病眼底病变患者白内障术后黄斑水肿和视力情况

目的：探讨糖尿病(DM)眼底病变患者白内障术后视力及黄斑水肿情况。

方法：选取2016-01/2017-09于我院治疗的白内障伴糖尿病眼底病变患者97例97眼,其中观察A组43例43眼(DM病程<5a),观察B组54例54眼(DM病程≥5a),同时选取单纯白内障患者60例60眼作为对照组,观察三组患者治疗前后最佳矫正视力(BCVA)、黄斑区视网膜厚度(中心凹区、内环区、外环区)、视网膜平均光敏感度(MS)等情况。

结果：术后1mo,对照组和观察A组患者BCVA优于观察B组(0.24±0.09),差异均有统计学意义(P<0.05); 观察B组患者黄斑区中心凹区、内环区和外环区厚度分别为283.30±17.06、335.51±20.26、297.28±20.22μm,均高于观察A组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05); 观察B组患者MS(11.54±1.89dB)明显低于观察A组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后3mo,对照组总渗漏率明显低于观察A组和B组,观察B组总渗漏率(55.6%)明显高于观察A组,差异均有统计学意义(P<0.0167)。

结论：相比于单纯白内障患者,合并糖尿病眼底病变的患者术后视网膜厚度明显增加,易发生黄斑水肿,同时影响术后视力恢复,其中DM病程较长者尤其明显。     

TXNIP对糖尿病视网膜病大鼠ROS/RNS应激及DNA损伤的影响及机制分析

目的观察硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对糖尿病视网膜病(DR)大鼠视网膜细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将30只大鼠随机均分为三组:对照组、DM组和Azas组。DM组和Azas组用链脲佐菌素(STZ)诱发建立糖尿病模型,对照组大鼠注射同体积的枸橼酸缓冲液。Azas组大鼠给予玻璃体内注射10μmol/L的azaserine 2. 5μl,在建模成功后第23天和第27天各一次,均注射在右眼。对照组和DM组大鼠在相同时间点注射同体积的生理盐水。检测各组大鼠视网膜中己糖胺通路(HBP)活性和TXNIP的表达、活性氧(ROS)/活性氮(RNS)应激、线粒体功能、DNA损伤、DNA损伤修复和细胞凋亡等指标。结果与对照组相比,DM组中O-Glc NAc修饰、TXNIP表达、ROS含量和S-nitrosocysteine(SNO)表达显著增加(P <0. 05),Azas组中上述指标均显著低于DM组(P <0. 05)。与对照组相比,DM组中线粒体膜电位、复合物Ⅰ活性和复合物Ⅲ活性均显著降低(P <0. 05),Azas组中线粒体膜电位、复合物Ⅰ活性、复合物Ⅲ活性和复合物Ⅳ活性显著高于DM组(P <0. 05)。与对照组相比,DM组中彗星尾长、尾DNA含量百分比、尾距、Olive尾距、γH2AX和H3K9Me3的表达均显著增加(P <0. 05),Azas组中上述指标均显著低于DM组(P <0. 05)。与对照组相比,DM组中BRCA2的表达均显著降低(P <0. 05),Azas组中BRCA1、BRCA2、DNAPKcs、Ku70和Ku80的表达显著高于DM组(P <0. 05)。与对照组相比,DM组中细胞凋亡率和cleaved-caspase-3的表达显著增加(P <0. 05),Azas组中上述指标均显著高于DM组(P <0. 05)。结论 TXNIP抑制可缓解DM诱导的视网膜细胞凋亡,其机制可能与降低ROS/RNS应激和DNA损伤、增加线粒体功能和DNA损伤修复有关。     

高迁移率族蛋白B-1和NADPH氧化酶衍生活性氧对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜电图波幅和玻璃体通透性的影响

目的:探究高迁移率族蛋白B-1(HMGB1)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶衍生活性氧(ROS)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜电图波幅和玻璃体通透性的影响及机制。方法:选取40只雄性SD大鼠,根据实验目的将大鼠分为对照组、DR模型组、HMGB1注射组和ROS抑制剂组。使用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病,进而发展DR模型。通过2’-7’-二氯荧光素-二乙酸酯(DCFH-DA)检测大鼠视网膜组织匀浆中ROS的生成。通过蛋白印迹分析视网膜组织中Nox2、HMGB1、Occludin和ZO-1的蛋白表达。通过PCR分析大鼠视网膜组织匀浆中PARP-1和Caspase 3的mRNA表达。通过视网膜电图分析大鼠a波和b波振幅。通过测量FITC-BSA荧光评估大鼠玻璃体通透性。结果:DR模型组和HMGB1注射组较对照组大鼠视网膜ROS水平升高(均P<0.05),ROS抑制剂组较DR模型组和HMGB1注射组ROS水平降低(均P<0.05)。DR模型组和HMGB1注射组较对照组Nox2和HMGB1的蛋白表达升高(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和D...     

miR-23a通过靶向GLS1调控H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞增殖、迁移

目的 探究氧化应激条件下miR-23a对视网膜色素上皮细胞增殖、迁移的影响及其机制.方法 以不同浓度的H202诱导ARPE-19细胞氧化应激,qPCR检测诱导后ARPE-19细胞miR-23a的表达水平以及增殖和迁移能力的变化;ARPE-19细胞转染miR-23a mimic、NC(negative control)m...