反义c-myc表达载体的构建及其瞬时表达对HepG2.2.15细胞的体外生物学效应

目的:构建反义RNA表达载体pcDNA3.1-as-myc,建立新型的c-myc反义RNA肝癌靶向性转移系统,研究瞬时表达对HepG2.2.15细胞的体外生物学效应。方法:XbaI和HindIII双酶切携带目的基因的质粒pcMYC和pcDNA3.1(-)真核表达载体,T4DNA连接酶连接,构建c-myc反义RNA表达载体。合成针对表皮生长因子受体(EGFR)的相应16肽GE7和流感病毒血凝素功能域的HA20寡肽,并与多聚赖氨酸连接,连接物与c-myc的反义RNA表达载体混合,构建新型c-myc反义RNA肝癌靶向性转移系统,即四元复合体。结果:成功构建反义RNA表达载体pcDNA3.1-as-myc,建立了as-myc四元复合体基因转移系统,经HepG2.2.15细胞系瞬时转染,证实c-myc蛋白的表达下降。结论:构建的反义表达载体pcDNA3.1-as-myc具有阻断c-myc表达的效应。     

人体肝癌癌基因N-ras产物P21的单克隆抗体

近年来的研究提示,癌变时癌基因被激活,这些癌基因相应的蛋白产物在癌变中有一定生理功能。我们曾显示了N-ras基因是人体肝癌转化基因之一;用人体原发性肝癌及肝癌细胞株7402的DNA所转染(transfection)的NIH/3T3细胞中的DNA有人的N-ras基因,而且这种经转化的细胞及7402细胞中N-ras的产物——分子量为     

用PCR技术扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的重链变区基因并进行克隆和序列分析

本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞中抽提总RNA,应用酸酚法抽提得到的总RNA,其质量较好,28S RNA:18S RNA约为2:1,基本上无细胞DNA     

人血浆转甲状腺素蛋白的提纯及其对肝癌细胞生长的抑制作用 *

目的:在人原发性肝癌中,转甲状腺素蛋白(transthyretin,TFR)基因转录严重受阻遏.在原发性肝癌患者的血浆中,TTR含量明显降低.因此,有必要从人血浆中提取TTR,观察TIR对人肝癌细胞生长的抑制作用.方法:先用40%饱和硫酸铵,再用5%酚预沉淀人血浆,采用DEAE-Cellulose离子交换层析提取TTR,所提蛋白经蛋白质印迹鉴定并于体外观察TTR对肝癌细胞生长的抑制作用.结果:从血浆中提取的TTR纯度为85%,经蛋白质印迹鉴定正确;体外实验初步证实,TTR对肝癌细胞的生长有明显抑制作用.结论:TTR对肝癌细胞的生长有明显抑制作用,这一性质为生物工程生产TTR,用于临床治疗,提供了可行性依据,从而在蛋白水平进一步证实TTR基因可能是与人肝癌相关的抑癌基因候选者.     

动脉灌注GE7系统介导β-半乳糖苷酶基因导入大鼠诱发性卵巢肿瘤细胞的研究

目的探讨GE7导入系统经动脉灌注将外源性基因导入卵巢肿瘤细胞的有效性及靶向性。方法以二甲基苯蒽卵巢埋植法，诱发大鼠卵巢肿瘤模型；将β-半乳糖苷酶基因(β-gal)与GE7导入系统构成四元复合物；取模型大鼠15只，随机分为3组，每组5只，分别经卵巢动脉及尾静脉注入不同浓度的四元复合物。72h后取大鼠的卵巢肿瘤、心、肝、脾、肺及肾脏，以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷(X-gal)染色，检测β-gal在肿瘤及各个脏器组织中的表达。结果经卵巢动脉灌注浓度为8μg／ml的四元复合物的大鼠的肿瘤组织，被均匀染为深蓝色，肝、脾、肺及肾脏均有不同程度的蓝染，心脏未见染色；经卵巢动脉灌注浓度为4μg／ml的四元复合物的大鼠的肿瘤组织，可见片状蓝染，肝脏仅见少量点状蓝染，其他脏器未见染色；而经尾静脉灌注浓度为8μg／ml的四元复合物的大鼠，仅在肺脏见少量片状蓝染，肿瘤组织及其他脏器均未见染色。结论GE7导入系统经动脉灌注导入外源基因，具有较高的转导率及器官靶向性，为应用插管方法进行卵巢癌的基因治疗研究，提供了实验依据。     

受体介导的基因转移与基因治疗

基因治疗成功的关键在于将治疗基因靶向性转移到细胞或组织，受体介导的基因转移能满足此要求，很有发展潜力的基本转移方法。然而，要将这种转移方法用于基因治疗，与转移系统有关的万分的化学特性与物理反应，靶细胞的受体表达水平，DNA配体复合物怎样逃逸溶酶体的降解以及包含在复合物中的外源基因的表达等都是至关重要的。本文综述了受体介导的基因转移的基本原理。DNA配体复合物形成的最佳条件与性质，影响基因转移与表达的各种因素以及近年来国内外受体介导的基因转移用于基因治疗取得的进展。     

表皮生长因子受体介导的多肽载体系统对人喉鳞状细胞癌的基因导入研究

目的检测一种新的以头颈肿瘤细胞表面受体为靶向的多肽基因导入系统对人喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)的基因导入效果。方法链霉亲和素标记生物素(1abeled streptavidin biotin，LSAB)法检测喉癌组织标本和培养的Hep2喉癌细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)的表达。建立人喉癌裸鼠移植瘤模型，分别构建绿色荧光蛋白标记基因和多肽载体系统、半乳糖苷酶报告基因和多肽载体系统四元复合物，分别进行报告基因和标记基因的体内外导入实验。结果EGFR在65％(15／23)喉癌组织标本呈阳性表达。Hep2细胞的EGFR亦呈阳性表达。EGFR主要位于细胞膜，部分位于细胞质内。绿色荧光蛋白基因转染Hep2后48h显微镜下可见荧光，72h达高峰，导入率大于80％(78／97)。β-半乳糖苷酶报告基因荷人喉癌裸鼠移植瘤瘤内转染12h即表达蓝染，24h蓝染程度加深，72h仍有表达。结论EGFR广泛存在于人喉癌细胞，新的多肽基因导入系统借助于EGFR可靶向性将报告或标记基因导人体内外人喉癌细胞，并得到高效表达，为头颈鳞癌的基因治疗提供了一个新的靶向高效的基因导入系统。     

新型基因转移系统介导p21基因治疗人脑胶质瘤的体外研究

近百年以来偶有肿瘤病人在某种病毒感染后会出现肿瘤暂时性消退的现象,引起医学家的关注,开始寻找能杀灭肿瘤细胞的病毒。至１９７０年,人们已发现了３８种在动物或人体体内具有抗肿瘤活性的病毒,并开始在晚期肿瘤病人中进行临床试验,但当时只能应用病毒的粗提物,其疗效并不显著,治疗后病人平均生存期很短。 近三十年来,由于病毒学、分子生物学及肿瘤学的飞速发展,人们己完成了多个病毒全部基因测序工作,并对其基因的结构及其功能进行了较为详细的研究,能有效地对病毒基因进行结构改造,使改造后的病毒能在肿瘤细胞中特异性增殖…     

肿瘤中血管内皮生长因子的表达

肿瘤生长与转移依赖于血管生长。血管生长因子直接或间接地刺激宿主的免疫细胞或基质细胞,促进内皮细胞的增殖与迁移,最终导致血管生长。许多生长因子都可以刺激血管的生长,尤其是血管内皮生长因子(vasuclarendothelialcellgrowthfactor,VEGF)[1],但目前肿瘤中支持血管生...     

受体介导的基因导入系统对家兔肝肾功能的影响

目前 ,肿瘤的基因治疗研究正迅速地由实验室走向临床[1] ,研究的热点之一是制备高效、导向性的基因导入系统。本研究观察了一种新的以表皮生长因子受体 (ＥＧＦＲ)为靶向的 16肽的真核表达基因导入系统(ＧＥ7系统 ) [2 ] 与细胞周期素依赖的蛋白激酶抑制物(ＣＫＩ)基因ｐ2 1相联接的复合系统 (ＧＥ7 ｐ2 1)经家兔门静脉给药后对肝、肾功能和血象变化的影响 ,以及家兔体内抗ＧＥ7 Ｐ2 1抗体产生情况。1　材料与方法1.1　主要试剂辣根过氧化物酶标记羊抗兔ＩｇＧ(中科院上海细胞生物研究所 ) ;邻苯二胺戊、巴比妥钠 (Ｓｉｇｍａ)。1.2　ＧＥ7 …