肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布

目的阐明广州地区肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布。方法用药敏纸片法对67株耐三代头孢菌素类抗生素的肺炎克雷伯菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型筛选,采用PCR检测β-内酰胺酶耐药基因,对部分ESBLs菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)。结果 67株菌中有58株菌ESBLs表型阳性,β-内酰胺酶基因检测显示,44株产CTX-M、43株产SHV(其中10株产超广谱的SHV)、14株产OXA-1群、38株产TEM,7株菌产AmpC。产CTX-M的菌株有20株产CTX-M-1群(包括15株产CTX-M-15)和24株产CTX-M-9群(包括14株产CTXM-14)。PFGE结果显示产ESBLs菌株同源性低。结论广州地区耐三代头孢肺炎克雷伯菌以产CTX-M-1群和CTX-M-9群ESBLs为主。     

分枝杆菌利福平耐药基因rpoB高通量突变文库的构建

【目的】建立利福平耐药基因rpoB高通量突变文库。【方法】通过同源重组和L5 attB噬菌体整合位点交换构建耻垢分枝杆菌ΔrpoB attB::rpoB菌株;基于L5 attB质粒交换系统和抗性选择培养基,挑取48个克隆以验证质粒替换的效率;针对利福平耐药决定区（RRDR）区域内以每3个碱基为单位设计简并性引物,通过PCR扩增获得该区域81个碱基的全覆盖式突变文库;文库片段与载体进行无缝克隆转化到大肠杆菌中形成大肠杆菌突变文库;基于质粒交换原理,将突变质粒库转化至耻垢分枝杆菌ΔrpoB attB::rpoB菌株中,替换原有L5 attB位点质粒,形成耻垢分枝杆菌突变文库;通过基因组提取、建库和高通量测序明确文库的基因型种类。【结果】与野生型rpoB基因（5 600 bp）相比,敲除株的扩增片段为2 200 bp,证明耻垢分枝杆菌ΔrpoB attB::rpoB条件性敲除株构建成功;质粒替换的成功率为100%;大肠杆菌文库和耻垢分枝杆菌文库中单氨基酸突变类型均为540种,大肠杆菌文库多点突变5 301种,耻垢分枝杆菌文库多点突变853种,大肠杆菌文库和耻垢分枝杆菌文库相关系数为0.84。...     

T-SPOT.TB在菌阳和菌阴结核病诊断中的应用价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在菌阳和菌阴结核病诊断中的临床价值和意义。方法回顾性分析759例菌阳结核、468例菌阴结核和606例非结核患者的T-SPOT.TB检测结果,总结该方法对菌阳和菌阴结核的诊断性能,同时比较T-SPOT.TB中抗原A和抗原B在结核诊断中的效果及一致性。结果 T-SPOT.TB在结核诊断中的总体敏感度为91.9%,特异性为82.0%;在菌阳和菌阴结核中敏感度分别为95.5%和85.9%。抗原A和抗原B的阳性率在菌阳、菌阴和非结核患者三组内差异均无统计学意义(P0.05),但抗原A和抗原B在菌阳结核诊断中一致性较差,表现为抗原A具有更好的敏感度,抗原B则特异性更高。结论 T-SPOT.TB试验对菌阳和菌阴结核均有较好的诊断价值,抗原A和抗原B在诊断中各具优势,两者联合使用有利于提高结核病诊断效果。     

中国西部、北部地区410例汉族病例乙型肝炎病毒基因型与肝病转归的相关性研究

目的 探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型与肝病转归的关系.方法 随机选取中国西部、北部地区汉族HBV感染者DNA含量104以上者410例,煮沸法提取HBV基因组模板,PCR扩增S区基因,应用自动测序仪测定目的基因序列,进行基因分型,应用SPSS10.0软件统计分析.结果 C型占91.95%,B型占6.83%,B、C混合型占0.24%,D型占0.98%.疾病进展研究分4种情形对基因型C、基因型B进行单因素方差分析:慢性病毒携带者(ASC),慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB),肝硬化(liver cirrhosis,LC),原发性肝细胞性肝癌(primary hepatocellular carcinoma,HCC).统计显示,感染基因型C后CHB更易发展为LC和(或)HCC,有统计学意义,但两基因型之间LC发展为HCC差别无统计学意义.LC vs.(CHB+HCC)统计显示:两组在基因型方面虽无统计学差异,但从Means Plots可以看出感染基因型C向肝硬化或肝细胞癌方向发展的趋势更明显.结论 中国西部、北部汉族HBV感染者中以感染基因型C为主,且感染基因型C较基因型B更容易发展为严重的肝病.     

临床常见革兰阴性菌对碳青霉烯类药物耐药性检测

目的完善我国西南地区临床常见革兰阴性细菌对碳青霉烯类药物耐药的分子流行病学资料。方法对2007年5月至2008年5月间从四川省4家医院采集的381株耐碳青霉烯类药物的临床菌株,进行4大类15种抗菌药物耐药性检测和产金属-β-内酰胺酶（MBLs）菌株筛选,并采用PCR对产MBLs菌株进行常见耐药基因的扩增。结果381株耐碳青霉烯类药物菌株中筛选到122株MBLs表型阳性的菌株,分别有45株产blaIMP（31株产blaIMP-9、8株产blaIMP-1、6株产blaIMP-4）、52株产blaVIM（48株产blaVIM-2,4株产blaVIM-1）、7株产blaNDM-1和16株菌株产blaSIM-1。此外,还有2株MBLs表型试验阳性菌株未鉴定出任何已知MBLs基因。结论381株受试菌株以多重耐药或全耐药菌株为主,我国西南地区耐碳青霉烯类药物临床菌株主要流行IMP型和VIM型MBLs,其中以产blaIMP-9和产blaVIM-2最为常见。     

临床大肠埃希氏菌耐药性检测及超广谱β-内酰胺酶流行病学调查

目的了解广州地区临床大肠埃希氏菌耐药及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的流行情况。方法对临床分离鉴定的57株大肠埃希氏菌进行5大类15种抗菌药物的耐药性检测。通过表型确认试验筛选出产ESBLs菌株,采用PCR法检测15种临床重要且常见的耐药基因。结果 57株大肠埃希氏菌对15种抗菌药物产生了不同程度的耐药性。其中有23株产ESBLs,ESBLs产生率为40.4%;24株产TEM,13株产CTX-M(其中,8株产CTX-M-55、4株产CTX-M-14、1株产CTX-M-27),2株产OXA-1。结论广州地区大肠埃希氏菌耐药情况依然严峻。同时,ESBLs流行趋势发生了变化:以前以流行CTX-M-9型为主,现在以CTX-M-1型和CTX-M-9型同时流行为主要特征。     

甲胎蛋白检测在HBV感染相关疾病中的临床意义

目的:探讨甲胎蛋白(AFP)检测在HBV感染相关疾病中的临床意义和作用。方法:检测慢性乙型肝炎(慢乙肝)合并肝癌(290人)、慢乙肝合并肝硬化(333人)、慢乙肝(361人)、无症状HBV携带(113人)及正常健康者(240人)血AFP水平,用Lo-gistic回归方法分析影响AFP升高的因素,用Spearmen等级相关方法分析AFP升高幅度与疾病严重程度的相关性。结果:五个观察组中,AFP>20ng/mL的阳性率分别为70.7%、44.4%、16.3%、2.7%和0%;AFP>200ng/mL阳性率分别为46.6%、9.3%、1.7%、0.9%和0%;AFP>400ng/mL阳性率分别为37.4%、4.8%、0.8%、0%和0%;AFP>1000ng/mL阳性率分别为26.6%、1.5%、0.6%、0%和0%。回归分析结果提示慢乙肝、饮酒量、饮酒年数、年龄及ALT和AST与AFP>20ng/mL相关;慢乙肝与AFP>200ng/mL相关;AST与AFP>400ng/mL相关;总胆红素及直接胆红素与AFP>1000ng/mL相关。等级相关分析结果发现AFP升高幅度与疾病的严重程度有相关性(r=0.533,P<0.01)。结论:AFP升高在不同HBV感染相关疾病组的临床意义有所不同;慢乙肝、饮酒、年龄及肝功能等因素可影响AFP的水平;AFP>400ng/mL高度提示肝癌的发生。