拟胚体贴壁时间对小鼠胚胎干细胞心肌分化的影响

目的观察拟胚体(EB)贴壁时间对小鼠胚胎干细胞(ESC)心肌分化的影响并研究其机制。方法用悬滴培养法促进ESCs形成EBs。EBs在不同的分化天数贴壁,观察搏动EBs百分比,RT-PCR检测Nkx2.5,GATA4和β-MHC mRNA表达,Western blot检测Src家族酪氨酸激酶磷酸化水平。结果分化第3,4天贴壁组搏动EB百分比及Nkx2.5,GATA4,β-MHC表达水平显著低于分化第5,6和7天贴壁组(P<0.05);EB贴壁能够使Src激酶磷酸化水平升高,Src激酶阻断剂PP2能够抑制贴壁诱发的Src激酶磷酸化水平升高(P<0.05);对于分化第4天贴壁组,在分化第4～6天使用PP2能够增加搏动EBs百分比及β-MHC表达水平(P<0.05)。结论 EB贴壁时间是影响ESC心肌分化的一个重要因素。在分化第4天或者之前贴壁可以显著抑制心肌分化,其机制可能是EB贴壁激活了Src激酶。     

双羟基黄酮醇抑制心衰后CaMKⅡ磷酸化降低室性心律失常易感性

目的:研究双羟基黄酮醇(DiOHF)通过抑制心衰(HF)后钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的磷酸化水平来降低心衰后室性心律失常的易感性。方法:采用主动脉缩窄术(TAC)构建压力负荷性心衰小鼠模型,用小动物超声机确认模型构建成功。假手术组小鼠分为Control组和Control+DiOHF组,心衰小鼠分为HF组和HF+DiOHF组。采用心内程序性电刺激(PES)分别检测4组小鼠的心室起搏阈值和心室不应期,诱导室性心律失常并进行心律失常评分。采用Western Blot分析各组心脏蛋白中的CaMKⅡ及其磷酸化水平。结果:与Control组相比,HF组小鼠的心室起搏阈值减小,不应期缩短,室性心律失常评分显著增高。而HF+DiOHF组相比HF组起搏阈值增大,心室不应期增长,室性心律失常评分显著降低。同时Western Blot显示HF组相比Control组,CaMKⅡ磷酸化水平显著升高,而HF+DiOHF组CaMKⅡ磷酸化水平相比HF组明显下降。结论:CaMKⅡ的过度激活引起心衰后的室性心律失常,而DiOHF可通过抑制心衰后CaMKⅡ的磷酸化水平来减少室性心律失常。     

单,双极射频消融猪心室肌的对比实验研究

本研究用单电极和不同间距双极消融猪心室内膜。各种方法所用射频能量均分为８周。结果；双极消融的组织学损伤分布于两电极与组织交界面能及两电极之间。各组能量下单极、ｍｍ及１０ｍｍ双极３种方法消融深度无统计学差异，而５ｍｍ和１０ｍｍ双极消融面积均大于单极消融。     

Effect of Radiofrequency Catheter Ablation on Calcium Channel of Ventricular Myocytes

（王扬淦）（陆再英）（赵华月）（唐明）（刘庆华）ＥｆｆｅｃｔｏｆＲａｄｉｏｆｒｅｑｕｅｎｃｙＣａｔｈｅｔｅｒＡｂｌａｔｉｏｎｏｎＣａｌｃｉｕｍＣｈａｎｎｅｌｏｆＶｅｎｔｒｉｃｕｌａｒＭｙｏｃｙｔｅｓ￥ＷＡＮＧＹａｎｇ－ｇａｎ；ＬＵＺａｉ－ｙｉｎｇ；Ｚ...     

拟胚体高密度培养促进小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化*

目的探讨拟胚体（EBs）培养密度对小鼠胚胎干细胞（ESCs）心肌细胞分化的影响。方法小鼠ESCs经过悬滴培养后形成EBs后,以高、低密度（120、60个EBs/60 mm组织培养皿）贴壁培养,免疫荧光检测心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(TnT)的表达。在不同时间点计算不同密度组搏动EBs百分比;RT-PCR检测Nkx2.5、GATA4、β-MHC及ANF基因表达水平;Western-blot检测TnT及p38表达水平。结果通过悬滴培养法形成的EBs能够出现自发性搏动并且有TnT表达。高密度培养组与低密度培养组相比具有更高的搏动EBs百分比,Nkx2.5、GATA4、β-MHC和ANF基因高表达水平,以及TnT蛋白高表达水平（P＜0.05）。高密度培养组的p38活性更高,使用p38特异性阻断剂SB203580能够降低高密度组搏动EBs百分比和TnT蛋白表达水平。结论 EBs贴壁培养密度是影响ESCs向心肌细胞分化的一个重要因素,EBs高密度培养相比于低密度培养能够获得更大程度的心肌分化,且该现象可能是由p38信号通路所介导。     

血小板/淋巴细胞比值与冠状动脉侧支循环形成的相关性

目的探讨血小板/淋巴细胞比值(platelet-to-lymphocyte ratio,PLR)与冠状动脉完全闭塞(chronic total occlusion,CTO)患者冠状动脉侧支循环(coronary collateral circulation,CCC)形成的关系。方法选取经造影确定主要冠状动脉至少1支存在CTO病变的患者137例,根据Rentrop分级标准对患者的CCC情况进行分级,进一步分为CCC形成不良组(Rentrop 0~Ⅰ级,n=57)和CCC形成良好组(RentropⅡ~Ⅲ级,n=80)。根据患者的血常规结果计算PLR值。结果两组患者的PLR分别为163±86和108±36,侧支形成不良组的PLR显著高于侧支形成良好组(P0.01)。多因素Logistic回归分析表明,PLR是影响CCC形成的独立相关因素(OR:1.02,95%CI:1.008~1.032;P0.01)。经ROC曲线获得的PLR预测CCC形成不良的曲线下面积为0.75(95%CI:0.67~0.84),与超敏C反应蛋白(hs-CRP)相当;当PLR截点取140.876时,其诊断效率最高,敏感度为61%,特异度为82%。结论在CTO患者中,PLR和CCC的形成相关,高PLR水平是预测CCC形成不良的独立相关因素,其预测价值与hs-CRP相当。     

Effect of Captopril on Membrane Currents of Ventricular Myocytes

ＥｆｆｅｃｔｏｆＣａｐｔｏｐｒｉｌｏｎＭｅｍｂｒａｎｅＣｕｒｒｅｎｔｓｏｆＶｅｎｔｒｉｃｕｌａｒＭｙｏｃｙｔｅｓＷＡＮＧＹａｎｇ－ｇａｎ（王扬淦）；ＬＵＺａｉ－ｙｉｎｇ（陆再英）（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔ...     

射频电消融术治疗心律失常的机理探讨

采用全细胞膜片钳技术研究射频电消融术对豚鼠心室肌细胞膜钙离子流（ＩＣａ）的影响。结果发现，在２０Ｗ×１０ｓ能量下，射频消融明显减小ＩＣａ，其影响范围达消融点外１．２ｃｍ以上。而在该能量下，其造成的组织学损伤范围仅为０．４１±０．１１ｃｍ。提示射频消融除了热效应引起小范围的组织学损伤外，并在更大的范围内影响细胞膜的离子流。为阐明射频消融组织损伤范围小而疗效高的机理提供了重要的实验依据．     

单电极与不同间距双电极射频消融——猪心室肌的对比实验研究

本研究用单电极和不同极间距的双电极(5mm,10mm)分别消融离体猪心室内膜,各种方法所用射频能量均分为8组(≤100焦耳,101～200焦耳,201～300焦耳,301～400焦耳,401～500焦耳,501～600焦耳,601～1000焦耳,≥1000焦耳),结果发现,双极消融所造成的组织损伤分布于两电极与组织的交界面处以及两电极之间.各相同能量组三种方法所消融心室肌肉膜深度无统计学差异,而在各能量组中5mm及10mm极间距双极消融面积均大于单极消融面积(P<0.05).在能量≤500焦耳时,5mm极间距双极消融面积大于10mm极间距双极消融面积(P<0.05).当能量大于500焦耳时.二者消融面积无统计学差异.提示双极消融与目前普遍采用的单极消融相比可明显扩大消融面积而不增加消融深度.推测双极消融法应用于临床可能比单极消融更有效而不增加心脏穿孔的危险性.目前国内、外常用的单次有效射频能量多不超过500焦耳,本实验提示,在小于500焦耳能量下,5mm间距双极消融效果优于10mm间距双极消融效果.     

形成拟胚体细胞数量对小鼠胚胎干细胞心肌细胞及内皮细胞分化的影响

目的:探讨形成拟胚体(EBs)起始小鼠胚胎干细胞(ESCs)数量对心肌细胞及内皮细胞分化的影响。方法:将形成EBs起始ESCs数量为400,1 000,4 000的3个组(HD400,HD1000,HD4000)通过悬滴法促进其分化。免疫荧光检测TnT及CD31的表达;在不同时间点计算三个组搏动EBs百分比;RT-PCR检测Nkx2.5,GA-TA4,β-MHC,flk-1,CD31,tie-2基因表达水平。结果:通过悬滴法形成的EBs能够出现自发性搏动并且有TnT及CD31表达;HD1000组和HD4000组相比HD400组有更高的搏动EBs百分比及Nkx2.5,GATA4,β-MHC基因表达水平;HD400组相比HD1000组和HD4000组有更高的flk-1,CD31,tie-2基因表达水平(P<0.05)。结论:形成EBs起始ESCs数量是影响心肌细胞和内皮细胞分化的一个重要因素,起始细胞数量多则心肌细胞分化程度高,数量少则内皮细胞分化程度高。