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1.
2.
人FascDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达的研究 总被引:1,自引:1,他引:1
为获得高质量及充足的Fas蛋白,采用PCR技术调整Fas基因的开放阅读框架,使之与生物素化蛋白基因阅读框架一致;缺失了FascDNA基因的起始密码子并增加一个大肠杆菌偏性终止密码子,构建FascDNA和生物素化融合原核表达质粒PinPoint-Fas。将重组质粒转入大肠杆菌HB101,经500mmolIPTG在37℃条件下诱导4h,SDS-PAGE及Western印迹检测融合蛋白在大肠杆菌得以高效表达,表达量为细菌总蛋白的13.8%。用亲和层析树脂对生物素化融合蛋白进行亲和层析纯化,得到Fas重组的蛋白,且表达的Fas融合蛋白具有抗体结合活性。此蛋白的表达成功将解决Fas膜蛋白不易提取的难题,为深入研究Fas提供了良好材料来源 相似文献
3.
流感病毒感染引起免疫损伤的同时可以激发机体产生免疫应答,在病毒的清除与疾病的恢复及再次感染过程中发挥着有效的防御作用.尽管流感病毒经常发生变异,但自然感染诱导的免疫防御机制仍可提供一定程度的交叉保护作用.这一系列免疫应答的激发及形成包括多种分子及细胞的参与,其发生、发展及转归直接决定着疾病的严重程度及免疫预防的有效性.了解天然免疫应答、粘膜免疫应答及获得性免疫应答的激发与维持可为流感病毒的防治及疫苗的研制提供思路. 相似文献
4.
流感病毒感染引起免疫损伤的同时可以激发机体产生免疫应答,在病毒的清除与疾病的恢复及再次感染过程中发挥着有效的防御作用.尽管流感病毒经常发生变异,但自然感染诱导的免疫防御机制仍可提供一定程度的交叉保护作用.这一系列免疫应答的激发及形成包括多种分子及细胞的参与,其发生、发展及转归直接决定着疾病的严重程度及免疫预防的有效性.了解天然免疫应答、粘膜免疫应答及获得性免疫应答的激发与维持可为流感病毒的防治及疫苗的研制提供思路. 相似文献
5.
Fas cDNA克隆、表达及重组蛋白纯化的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:获得高质量及充足的Fas重组蛋白。方法:采用PCR构建表达重组质粒,亲和层析纯化Fas重组蛋白,ELISA检测其免疫学功能。结果:①PCR扩增获得目的片段约 470 bp。②Sanger双脱氧链终止法测序表明,该 DNA序列仅 174位由A→G突变,属于同义突变,与已知的Fas膜外区氨基酸完全一致。③重组质粒经IPTG诱导有一蛋白得以表达,其目的融合蛋白占细菌总蛋白的17. 4%,分子量约为 34.3 kD。④经 Factor Xa切割 Fas融合蛋白,纯化获得 Fas重组蛋白,Western印迹出现特异性Fas蛋白带,分子量为21.3kD,与预测结果相吻合。⑤ELISA检测 Fas重组蛋白,具有抗体的免疫学活性。结论:成功地表达并纯化了Fas重组蛋白,解决了Fas不易获得的难题,为研究Fas提供了良好的实验材料。 相似文献
6.
鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 以重组霍乱毒素B亚单位(rCT-B)为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,检测鼻咽喉、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-V的黏膜分泌型IgA;采用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化。结果以rCT-B为佐剂的鼠疫F1-V重组蛋白黏膜疫苗滴鼻免疫后,能够诱导血清中IgG、IgA抗体比正常对照组显著升高(P〈0.01),同时诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内特异性黏膜抗体升高,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显著(P〈0.01)。与单纯的F1-V组相比,不同剂量比例疫苗组都能诱导较高、较快的血清IgG、IgA和黏膜sIgA,其中1:2疫苗组能诱导更强的系统免疫和黏膜免疫,但是相比之下,5:1疫苗组是最合适的免疫剂量。结论rCT-B佐剂不仅能提高鼠疫F1-V黏膜疫苗的系统全身免疫应答,还能促进诱导呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜sIgA抗体,增强局部免疫应答,提示rCT-B佐剂能显著提高鼠疫感染的免疫应答作用,这为下一步疫苗的免疫保护评价奠定了基础。 相似文献
7.
目的 构建携带鼠疫耶尔森菌F1-V融合基因的重组减毒沙门菌苗,口服免疫Balb/c小鼠检测其免疫原性,为口服鼠疫活载体DNA疫苗研究打下基础.方法 将F1-V融合基因克隆到真核表达载体asd-pVAX1,进一步依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd-pVAX1/F1-V),提取重组质粒转染COS-7细胞并做免疫组化和Western-blot检测F1-V融合蛋白在细胞中的表达.以1×109CFU/只的剂量3次口服免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中抗体水平.结果 构建的重组减毒沙门菌转染COS-7细胞后,免疫组化和Western-blot试验证明F1-V融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清有特异性抗体IgG产生.结论 构建的重组沙门菌能运送DNA疫苗到体内并成功释放质粒刺激机体产生特异性免疫应答,为口服鼠疫活载体DNA疫苗的黏膜免疫研究打下了基础. 相似文献
8.
DNA疫苗既能诱导体液免疫又能诱导细胞免疫,是近年来疫苗研究的热点领域,被称为疫苗史上的第三次革命。但DNA疫苗诱导特异性免疫应答的水平不高,限制了它的广泛应用。本对提高DNA疫苗免疫原性的几种策略进行综述。 相似文献
9.
目的:构建真核表达质粒PVAX1/M,免疫Balb/c小鼠,测定其诱导的特异性免疫应答,探讨传染性非典型肺炎(severeacuteresperatorysyn-drome,SARS)防治和康复的可能手段。方法:根据GenBank中登录的SARS-CoVM蛋白基因序列设计引物,采用反转录聚合酶链反应方法从感染SARS病毒的VeroE6细胞中扩增得到约666bp的片段,构建重组真核表达质粒PVAX1/M。体外转染COS-7细胞,细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达后,肌肉注射免疫Balb/c小鼠(雌性,6周龄),加强免疫3次后,测定其诱导免疫应答的能力。结果:构建的重组质粒经酶切及测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;细胞免疫化学方法均显示重组质粒可在COS-7细胞中表达有免疫原性的SARS-CoVM蛋白;免疫小鼠血清中检测到较高滴度的抗体,并能诱导特异性的CTL反应。结论:成功构建真核表达质粒PVAX1/SARS-CoVM,并能诱导小鼠产生特异性的免疫应答,为SARS的预防康复提供了可能的治疗手段。 相似文献
10.
SARS-CoV S蛋白全长基因克隆及其表达的初步研究 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:克隆表达SARS-CoVS蛋白,构建SARS全长基因疫苗。方法:从SARS病毒的总cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoVS1和S2蛋白的编码序列,再将二者分别克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。然后进一步将S1和S2连接到pVAX1中。酶切和测序鉴定阳性克隆。采用脂质体法转染VeroE6细胞,用Western检测S蛋白的表达。结果:PCR方法分别扩增出了1900bp和1800bp左右的基因片段,两片段插入pVAX1构建重组表达载体后,经序列测定证实该插入片段为SARS病毒S蛋白编码序列。将重组子转染VeroE6细胞,收集细胞总蛋白,Western检测获得特异蛋白带。结论:成功克隆并表达了SARS-CoVS蛋白,为其作为SARS基因疫苗研究打下基础。 相似文献