CD4+、CD8+、CD25+、CD69+淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体及同期假孕小鼠淋巴结中的差异

目的：研究种间胚胎植入期母体淋巴结中表达CD4^＋、CD8^＋、CD25^＋、CD69＋T细胞的百分比变化,并探讨这种变化对种间胚胎植入的影响。方法：利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测种间、同种胚胎移植以及同时期假孕母体淋巴结中表达CD4^＋、CD8^＋、CD25^＋、CD69＋的T淋巴细胞对应CD3^＋细胞的百分率。结果：与同种胚胎移植后的植入相比,种间胚胎移植后植入期母体淋巴结中,CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD25^＋淋巴细胞占CD3^＋淋巴细胞的比例均极显著低于同种胚胎移植的植入期受体（P〈0.01）;而CD3^＋CD8^＋淋巴细胞占CD3^＋淋巴细胞的比例显著低于同种胚胎移植的植入期受体（P〈0.05）;CD3^＋CD69＋淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体淋巴结中的比例却无显著差异（P〉0.05）。种间胚胎植入时母体淋巴结中CD4^＋/CD8^＋的比例,与同种胚胎植入受体和假孕小鼠相比,三者之间均无统计学意义上的显著差异（P〉0.05）。结论：种间胚胎移植后从植入期开始,母体淋巴结中的淋巴细胞就发生了不利于胚胎植入的全身免疫反应。     

双氢青蒿素对小鼠T细胞的免疫抑制作用

目的:研究双氢青蒿素(DHA)在体外对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,探讨其可能的免疫作用机制。方法:加入不同浓度DHA,以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导T细胞活化增殖,用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色法分析T细胞增殖情况;利用流式细胞术(FCM)结合双色免疫荧光染色技术检测CD3+T细胞早、中、晚期活化标志CD69、CD25、CD71表达情况;用Fluo-4/AM荧光钙离子探针技术检测细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度的变化;以碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布;运用流式细胞术(FCM)结合三色荧光染色技术检测CD4+CD25highTreg早期活化抗原CD69表达情况。结果:CFDA-SE染色结果显示,DHA能有效抑制ConA诱导的T细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性;DHA对ConA刺激的CD3+T细胞CD69、CD25的表达有促进作用,而对CD71的表达有抑制作用,均呈剂量依赖性;DHA单独作用不能引起T细胞[Ca2+]i的升高,在ConA的刺激下能引起[Ca2+]i浓度升高;PI染色流式分析结果显示,DHA阻滞细胞于G0/G1期,阻止细胞进入S期和G2/M期;DHA能够下调CD4+CD25highTreg细胞CD69的表达。结论:DHA对小鼠淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

喜树碱诱导Jurkat细胞线粒体膜电势和线粒体质量变化的研究

目的： 研究喜树碱（camptothecin，CPT）诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体膜电势和线粒体质量的变化。 方法： 用喜树碱处理Jurkat细胞，利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞早期凋亡, PI染色流式细胞术测细胞周期, Annexin V-PE/DiOC6(3) 双染流式细胞术检测线粒体膜电势（△ψm），NAO染色流式细胞术检测线粒体质量。 结果： 在10 μmol·L-1 CPT诱导下，6 h 时Jurkat 细胞早期凋亡的细胞比率（22.59±1.04）%显著高于对照组（3.93±0.73）%（P<0.01）。CPT组坏死比率（2.48±0.53）%与对照组（2.78±0.63）%无显著差异（P>0.05）；并可使细胞出现明显的凋亡峰。晚期凋亡的细胞比率为（13.58±0.97）%显著高于对照组（3.18±0.51）%（P<0.01），CPT组G0/G1期细胞比率（48.14±0.96）% ，明显高于对照组（44.09±0.43）%（P<0.01）。CPT组线粒体发生明显去极化现象，AnnexinV+DiOC6(3)-的细胞比率为（19.47±0.69）%，而对照组比率为（4.21±0.40）%，差异显著（P<0.01）。同时，CPT组线粒体质量显著低于对照组：CPT组NAO+细胞比率为（74.77±1.66）%，对照组为（92.24±1.41）%（P<0.01）。 结论： CPT诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体去极化作用增强并且线粒体质量下降，表明该凋亡过程与线粒体途径密切相关。     

氧化苦参碱对刀豆蛋白A刺激的小鼠淋巴细胞增殖影响的研究

目的应用荧光染料CFDA-SE (Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester)染色检测氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响.方法利用CFDA-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂Con A和OMT的共同作同下荧光强度的变化,并应用相关软件分析OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响程度.结果培养48h,流式细胞仪检测的淋巴细胞CFSE荧光强度,对照组未出现子代峰,即淋巴细胞没有增殖.Con A组明显的出现3个峰,说明Con A刺激后48h细胞出现了明显的细胞增殖,与对照组相比荧光强度减半明显.在Con A OMT各剂量组中,高剂量组即OMT500μg/mL组,原代峰显著高于Con A组,各子代峰显著低于Con A组,但与对照组比较差异无显著性,说明OMT明显抑制了淋巴细胞的增殖,中剂量组即OMT125μg/mL组和高剂量组结果一致,说明这一剂量的OMT仍然明显抑制小鼠淋巴细胞的增值,OMT低剂量组即OMT31μg/mL组和Con A组比较差异没有显著性,和对照组比较,各代细胞荧光强度差异有显著性,即这一剂量的OMT对淋巴细胞增殖抑制作用不明显.培养72 h后,各组之间荧光强度变化情况与48h的情况基本一致.经CELLQuest软件拟合后得到各项增殖指标显示,OMT在500μg/mL、125μg/mL和31μg/mL组呈剂量依赖地抑制Con A对淋巴细胞促增殖作用.结论 CFDA-SE染色和流式细胞术是分析淋巴细胞增殖的有力工具.OMT在500、125和31μg/mL呈剂量依赖地抑制淋巴细胞的增殖,即OMT对小鼠淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用.