乳鼠原代成骨细胞的培养优化

目的 探讨适宜培养乳鼠原代成骨细胞的培养基配比及培养时间,为体外成骨细胞原代培养提供改良实验方案。方法 用间断酶消化法消化CD1乳鼠颅骨提取原代成骨细胞,差速离心获得纯化成骨细胞。制定诱导时间、胎牛血清、β-甘油磷酸钠盐、地塞米松浓度梯度实验,用Western blot与免疫荧光测定成骨细胞成熟标志物,通过碱性磷酸酶、茜素红染色、超微结构鉴定其成骨活性。结果 (1)间断酶消化法可从乳鼠颅骨中获得原代细胞进行增殖及传代扩增,细胞具有典型成骨细胞形态学和生物学活性。(2)成骨细胞成熟标志物表达与诱导培养时间、胎牛血清浓度成平行关系,使用10%血清培养14 d即可获得成熟成骨细胞。(3)分别在不同浓度含β-甘油磷酸钠盐及地塞米松培养液中诱导原代成骨细胞分化,于10 mmol/L β-甘油磷酸钠盐及5 nmol/L地塞米松培养条件下成骨细胞成熟标志物表达较高(P<0.01),碱性磷酸酶及茜素红染色明显,成骨活性良好。结论 CD1乳鼠颅骨提取的原代成骨细胞在含10%胎牛血清、10 mmol/L β-甘油磷酸钠盐溶液及5 nmol/L地塞米松的诱导培养基中培养,于14 d即有良好的成骨活性,...