空肠弯曲菌DNA疫苗构建及其疫苗免疫程序研究

目的:构建空肠弯曲菌peb1A基因真核表达载体,探讨DNA疫苗不同免疫程序的免疫效果。方法:以重组pET28a(+)-peb1A质粒为模板,将空肠弯曲菌peb1A基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染COS-7细胞中表达,Western blot鉴定表达蛋白;昆明小鼠随机分组:设空白对照组、空载体对照组、pcDNA3.1(-)-peb1A实验组,用ELISA法检测免疫后的昆明小鼠血清IgG和IgM抗体水平。结果:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经双酶切和PCR鉴定,构建正确。peb1A基因测序结果与GenBank中peb1A基因序列一致。重组质粒成功转染COS-7细胞,并能正确表达重组蛋白。裸DNA组IgG水平均高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。同一剂量短时间(0、10、20天)免疫程序优于长时间(0、15、25、35天)免疫程序(P<0.05)。结论:成功构建空肠弯曲菌真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A,其经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性,短时间免疫程序免疫效果好。     

软组织肿瘤穿刺活检的病理诊断及临床应用

目的 探讨软组织肿瘤穿刺活检的病理诊断及临床应用价值.方法 选取2018年6月至2020年6月暨南大学附属第一医院收治的158例软组织肿瘤患者,均于术前行穿刺活检,以术后病理检查结果为金标准,分析穿刺活检诊断软组织肿瘤的价值,评价穿刺活检诊断恶性软组织肿瘤的效能.结果 术后病理检查结果显示,158例软组织肿瘤患者中包括...     

空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗的Th免疫应答及作用

目的:探讨以壳聚糖为佐剂的空肠弯曲菌基因疫苗免疫小鼠后的Th细胞免疫应答状态。方法:昆明小鼠随机分组:设空白对照组、空载体组、pcDNA3.1(-)-peb1A组、壳聚糖+pcDNA3.1(-)-peb1A组,各组均采用小鼠股四头肌注射法。在第0、10、20天免疫,于每次免疫后第10天采集各组小鼠血浆,间接ELISA法检测免疫后不同时间小鼠血浆中Th1、Th2细胞因子的含量。结果:Th1类细胞因子IL-2、IFN-γ,在第10、20、30天,裸DNA组、佐剂DNA组、空载体组及NS组两两相比均无显著性差异(P>0.05);Th2类细胞因子IL-4、IL-10:实验组高于两对照组,在IL-4的检测中有显著性差异(P<0.05),在IL-10的检测中裸DNA组高于空白对照组有显著性差异(P<0.05),其裸DNA组高于空载体组,仅在第20天有显著性差异(P<0.05);佐剂DNA组高于裸DNA组,在IL-4的检测中有显著性差异(P<0.05),在IL-10的检测中,仅在第10、20天有显著性差异(P<0.05);佐剂DNA组高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。结论:以壳聚糖为佐剂的空肠弯曲菌基因疫苗可促进Th2细胞为主的免疫反应。     

空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗对小鼠免疫原性和保护性研究

目的:研究空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗的免疫原性和保护性。方法:健康雄性昆明小鼠分为实验组和对照组。实验组设pcDNA3.1(-)-peb1A组3个剂量和壳聚糖-pcDNA3.1(-)-peb1A组3个剂量;对照组设空载体pcDNA3.1(-)(100μg/100μl)组和生理盐水(NS)组,各组均采用小鼠股四头肌注射法。在第0、10、20天免疫,于每次免疫后第10天采集各组小鼠血清,以间接ELISA法检测血清中特异性IgM、IgG的含量。分离各组小鼠脾淋巴细胞包被细胞培养板,以细胞ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞CD20、CD21表达水平。设空肠弯曲菌液灌胃攻击免疫后小鼠,检测肠道分泌液细菌培养数量。结果:裸DNA组和壳聚糖-DNA组各组特异性IgG水平均高于两对照组(P<0.05)。裸DNA组和壳聚糖-DNA组小鼠脾淋巴细胞CD20、CD21表达水平均高于两对照组(P<0.05),壳聚糖-DNA组高于裸DNA组(P<0.05)。肠道分泌液细菌培养结果细菌指数裸DNA组的低于两对照组;佐剂DNA组低于裸DNA组。结论:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性和保护作用,壳聚糖能增强pcDNA3.1(-)-peblA的免疫原性,有望成为空肠弯曲菌基因疫苗的候选佐剂。     

空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A诱导的T细胞活化增殖研究

目的探讨空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)pcDNA3.1(-)-peb1A疫苗免疫昆明种小鼠后T细胞活化增殖状态。方法重组质粒CJ pcDNA3.1(-)-peb1A免疫昆明种小鼠后,取其脾淋巴细胞,应用ELISA法检测其膜表面分子CD3、CD4、CD8、CD25和CD28。结果检测结果显示:CD3检测,佐剂DNA组高于裸DNA组,在第10天有显著性差异(P<0.05);CD8检测,佐剂DNA组高于裸DNA组,在第10、20天均有显著性差异(P<0.05),裸DNA组也高于两对照组,但仅在第20天有显著性差异(P<0.05);CD25检测,裸DNA组高于NS组,但仅在第10天有显著性差异(P<0.05),佐剂DNA组高于裸DNA组,也仅在第20天有显著性差异(P<0.05);CD4及CD28检测,佐剂DNA组高于裸DNA组,在第10、20天均有显著性差异(P<0.05);在第10、20天各脾淋巴细胞膜表面分子检测,佐剂DNA组高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。结论 CJ pcDNA3.1(-)-peb1A疫苗能够有效地诱导T细胞活化增殖。