K562细胞中N-乙酰基转移酶10的RNA结合图谱分析

目的 对N-乙酰基转移酶10 (NAT10)在人慢性髓原白血病细胞系K562中的RNA结合图谱进行描绘。方法 利用紫外交联免疫沉淀技术(eCLIP)捕获NAT10在K562细胞中结合的转录本集合,对其进行高通量测序,并对数据进行生物信息学分析。通过peak-calling分析和对peaks进行注释,鉴定NAT10结合位点。并对所结合基因的类型和结合区域进行分析。进一步通过基因功能富集分析,探索其结合的RNA的功能。结果 NAT10主要结合于蛋白质编码基因的转录本,并在3′非翻译区域(3′UTR)富集,预测显示其结合的转录本与DNA损伤修复等功能相关。结论 NAT10可能通过与DNA损伤修复相关信使RNA(mRNA)的3′UTR区域结合,实现基因表达调控作用。     

RhoA因子在单增李斯特菌侵袭HepG2细胞中的作用

目的研究HepG2细胞的Rho家族RhoA因子在Lm侵袭中的作用。方法构建真核表达载体p3×FLAG-Myc-CMV-24-RhoA,经脂质体法转染HepG2细胞,使HepG2细胞过表达RhoA;同时针对RhoA序列合成siRNA,脂质体法转染HepG2细胞,抑制HepG2细胞RhoA表达。2种细胞同时感染Lm,通过Real-time PCR检测HepG2细胞RhoA上调/下调时培养物中Lm-Hly基因拷贝数,评估Lm数量。结果HepG2细胞转染p3×FLAG-Myc-CMV-24-RhoA载体后,Western blotting法检测RhoA表达量升高,且48 h升高显著,此时HepG2细胞内Lm数量明显低于对照组;HepG2细胞转染siRNA后,Western blotting法检测RhoA表达量降低,且72 h降低显著,此时HepG2细胞内Lm数量明显高于对照组。结论Lm侵入受HepG2细胞RhoA因子调控,主动下调细胞RhoA因子表达可能是Lm侵袭机制之一。