蓖麻蚕蛹生物反应器生产重组人表皮生长因子的研究

重组人表皮生长因子(rhEGF)已经广泛应用于医疗和化妆品。以杆状病毒AnpeNPV为基因表达载体,昆虫为生物反应器而建立的蛋白表达系统已获得成功。本文以人表皮生长因子(hEGF)基因替代柞蚕AnpeNPV中的核多角体基因而获得的AnpehEGF病毒为载体、蓖麻蚕蛹为生物反应器表达的rhEGF蛋白质,采用PCR、West-ern blot和ELISA等实验方法对其进行检测,硫酸铵沉淀和Ni-NTA Agrose亲和层析法对其进行分离纯化。实验结果显示,无论是在基因或是蛋白水平上都可检测到rhEGF的表达。AnpehEGF感染蚕蛹后第6d开始检测到rhEGF的表达量快速上升,第12d达到高峰,第3、6、9、12d的表达量分别为19.77、24.90、618.59、1 952.46ng/g,而到了病毒感染后期(第15d)出现了蛋白降解现象。表达的rhEGF通过分离纯化获得了较纯的产品。结果表明蓖麻蚕蛹作为生物反应器生产外源蛋白rhEGF是可行的,说明利用AnpeNPV和蓖麻蚕蛹可开发更加低成本而又高效的rhEGF生产新途径。