艰难梭菌感染C57BL/6小鼠模型的建立方法研究

目的 建立C57BL/6小鼠抗菌药物诱导艰难梭菌感染模型,为更有效地认识人类艰难梭菌感染性疾病的发病机制及治疗措施提供依据。方法 C57BL/6小鼠经抗菌药物混合液预处理3天后,进行克林霉素腹腔注射。之后给予高、中、低浓度艰难梭菌ATCC43255悬液灌胃,建立艰难梭菌感染诱导肠损伤和结肠炎的CDI模型。观察小鼠的病死率,平均相对体重、结肠组织病理学评分和粪便艰难梭菌A&B毒素变化。结果 小鼠经抗菌药物处理和艰难梭菌灌胃后,出现腹泻,体重下降,粪便艰难AB毒素检测阳性。结肠病理切片可见炎性细胞浸润和组织坏死等结肠炎表现。随着灌胃菌液浓度的增加,小鼠症状越重,粪便毒素值越高。造模后存活下来的小鼠即使再次给予艰难梭菌灌胃也不再出现症状。结论 C57BL/6小鼠艰难梭菌感染模型与人类CDI病程变化相似,可进一步用于CDI防治措施的研究。     

河南省首例027型高产毒艰难梭菌重症感染报告

艰难梭菌是一种革兰阳性厌氧芽孢杆菌,为抗菌药物相关性腹泻和院内感染的主要病原体之一。艰难梭菌感染较轻者会导致腹泻,严重者可引发伪膜性肠炎,且常伴有中毒性巨结肠、肠穿孔、感染性休克等并发症,甚至死亡。在欧美等国大规模暴发流行的艰难梭菌主要是027型高产毒艰难梭菌[1-2]。在我国,027型高产毒艰难梭菌于2009年在香港被首次发现,随后在各地均有散发的报道[3-4]。但在河南省尚无027型高产毒艰难梭菌感染的报道。本文就河南省首例027型高产毒艰难梭菌感染所致肠梗阻的病例进行报道。     

重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1～4)的构建和表达

目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1～4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1～4)质粒构建及表达成功。     

Tudor-SN蛋白一级结构间断的SN5结构域质粒的拼接构建

目的 实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段(SN5α、SN5β)的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法 利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测.     

蛋白表达抑制稳定株MDA-MB-231-Tudor-SNI的筛选和鉴定

目的 采用针对人类Tudor-SN基因的RNA干扰(RNAi)技术建立Tudor-SN表达抑制的乳腺癌MDA-MB-231稳定细胞株.方法 利用脂质体转染方法将pGenesil-shRNA-hTudor-SNI质粒转染进入MDA-MB-231细胞,经G418筛选出稳定株,通过RT-PCR检测Tudor-SN的mRNA水平,再以Western印迹技术鉴定Tudor-SN蛋白表达情况并计算蛋白表达抑制率.结果 与对照组相比,以G418筛选的MDA-MB-231-Tudor-SNI稳定株Tudor-SN的mRNA水平降低(P＜0.01,n=3),蛋白表达水平明显下调(P＜0.01,n=3),蛋白表达抑制率达78.12 %.结论 成功筛选并鉴定人类Tudor-SN蛋白表达抑制MDA-MB-231稳定株,有助于深入研究Tudor-SN蛋白在乳腺癌中的作用.     

不同温度和时间对血常规参数检测结果的影响

目的探讨EDTA-K2抗凝静脉血在不同温度和时间对血常规参数检测结果的影响。方法运用XT-1800i全自动血细胞分析仪测定91份在不同温度下保存不同时间的血标本,其中31份血标本于4℃冷藏,并于0.5h、24h、48h、72h测定。30份血标本20℃保存,于0.5h、2h、4h、8h、24h测定;另30份血标本20℃保存,于24h、48h、72h再测定,各以0.5h测定结果为对照组,观察血常规参数检测结果变化。结果 20℃保存24h,WBC、RBC、Hb、MCH及WBC与对照组差异均无统计学意义(P>0.05),16种血常规参数差异均有统计学意义(P<0.05);20℃保存72h,WBC、RBC、Hb差异均有统计学意义(P<0.05),16种血常规参数从24h即有明显的变化,差别有统计学意义(P<0.05);4℃冷藏72h,WBC、RBC、MCH、Hb在72h内比较稳定,HCT、PLT及WBC分类在48h内比较稳定,14种血常规参数在24h有明显变化。结论血常规标本4℃冷藏,血细胞参数结果较稳定,但仍要考虑到个别参数的变化,以便于为临床提供更可信的数据。     

医疗机房网络数据维护与可靠性 柯尼卡793激光相机故障维修二例

我院于2009年购进一台柯尼卡（KONICA）793干式激光相机，与CR、DR、数字胃肠机等数字化医学影像检查设备配套使用，其最小像素是25“m，具有功能强大、影像清晰的特点，能够为临床提供准确、优质的影像。     

艰难梭菌感染主要ST型菌株生物学特征的比较

目的探究致医院感染性腹泻艰难梭菌主要序列型别(ST81、ST8和ST42)之间的毒力特征、芽孢形成能力及耐药机制等方面的差异。方法收集2017年9月至2019年9月首都医科大学附属北京友谊医院临床住院腹泻患者送检艰难梭菌培养的稀便标本816份进行艰难梭菌分离和培养。以该院主要序列型别的艰难梭菌ST81(26株)、ST8(15株)和ST42(14株)为实验菌株。应用聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫荧光法分别检测艰难梭菌的毒素基因和毒素A/B蛋白的表达;采用平板涂布法检测艰难梭菌的芽孢形成能力;采用琼脂稀释法检测艰难梭菌对11种抗菌药物的耐药性;采用PCR方法扩增耐药基因、测序及氨基酸突变分析艰难梭菌携带的耐药基因和氨基酸的突变位点。计量资料的组间比较采用Kruskal Wallis秩和检验, 率的比较采用Fisher精确检验。结果 ST81型菌株为tcdA-tcdB+/cdtA-cdtB-毒素型别, ST8和ST42型菌株均为tcdA+tcdB+/cdtA-cdtB-毒素型别, ST42、ST8和ST81型别菌株产生毒素A/B蛋白的产量分别为41.9、2.4和0.83, ST42和ST8...