三种多糖对抗人红细胞A、B抗原单克隆抗体稳定性的影响

目的研究葡萄糖、蔗糖、麦芽糖三种多糖对抗人红细胞A、B抗原单克隆抗体（简称单抗）稳定性的影响,进一步延长血型试剂的使用期限。方法将葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为稳定剂,计为葡萄糖组、蔗糖组、麦芽糖组,生理盐水做对照（盐水组）,分别加入抗人红细胞A、B抗原的腹水型单抗溶液,37℃、室温、4℃条件下观察抗体效价变化。结果 0.1～0.8 mol/L的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖对抗A、B单抗效价均有一定稳定作用,同种糖高浓度的稳定效果优于低浓度,最佳有效稳定浓度为0.4 mol/L。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为稳定剂存在时,37℃下腹水单抗的效价稳定性可延长至2～3周,室温下可延长至4～6个月,4℃下可延长至24个月。结论葡萄糖、蔗糖、麦芽糖均可作为单抗的稳定剂,可提高抗体的稳定性,延长使用期限;蔗糖效果更好。     

抗HIV-1 gp41单克隆抗体的制备及意义

目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB／c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体（mAb）,用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵（SAS）纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测gp41蛋白的最佳配伍单抗,分别包被ELISA板及作为酶标mAb,建立双mAb夹心ELISA法。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了12株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选出2株mAb：7D4和9G2-HRP建立了双mAb夹心ELISA法,检测HIV-1 gp41抗原的灵敏度是1μg/L。结论获得12株效价高的抗HIV-1 gp41的mAb,建立了特异性强、灵敏度较高的检测HIV-1 gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。     

巧克力中具有抗氧化活性的多酚体外对人体免疫功能的调节

巧克力中具有抗氧化活性的多酚体外对人体免疫功能的调节［英］／ＳａｎｂｏｎｇｉＣ．．．／／ＣｅｌｌＩｍ－ｍｕｎｏｌ．－１９９７，－１２９～１３６需氧细胞电子转移反应中产生的ＯＨ、Ｏ２、Ｈ２Ｏ２、ＨＯＣＬ和１￣Ｏ＿２等总称之为ＲＯＳ。ＲＯＳ作为第二信使参...     

抗HIV-1P24单克隆抗体纯化方法的研究

目的 建立从小鼠腹水中纯化抗人重组HIV-1 P24单克隆抗体的方法.方法 含抗P24单克隆抗体的腹水经离心、过滤及缓冲液变换等处理后,先经盐析处理,去除杂蛋白.再经DEAE sepharose CL-6B、protein G亲和层析柱进一步纯化.结果 经纯化后获得的抗P24单克隆抗体,其生物学活性、抗体效价保持良好,纯度达到96.1%,抗体回收率达63.3%.结论 建立的单克隆抗体纯化方法简便,高效,所得的单克隆抗体纯度高,生物学活性好.     

rhIL-15表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 获得rhIL-15基因工程菌，方法 从肺癌细胞株A549中提取细胞总RNA，用RT-PCR法扩增编码人IL-15成熟区基因的片段，经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后，插入融合表达质粒pGEX-4T-2的相应酶切位点，构建重组融合蛋白表达质粒，并转化感受态大肠杆菌BL2l而得到工程菌。结果 重组质粒插入片段核酸序列测定的结果，与文献报道的IL-15蛋白成熟区的核酸序列相一致，该工程菌所表达的融合蛋白多数以包涵体的形式存在，占菌体蛋白总量的39%。复性后，纯化的rhIL-15蛋白经MTT比色法初步测定，具有促进CTLL-2细胞增殖的能力，结论 获得了具有生物学活性的rhIL-15高效表达菌株。     

抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性.方法 分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗).纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶.分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA.结果 获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株.用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50 μg/L的gp36.结论 为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗.     

抗HIV-1 p24 单克隆抗体的制备、特性鉴定及初步应用

目的：制备抗HIV-1p24单克隆抗体（mAb）及特性鉴定。方法：采用细胞融合技术制备可稳定分泌抗HIV-1p24mAb的杂交瘤细胞。选择高效价、识别不同抗原表位的mAb纯化后，分别包被ELISA板及作为酶标记mAb，建立双mAb夹心ELISA法，检测400份正常人血浆，20份抗HIV抗体阳性（p24抗原阴性）的血浆，20份HIV-1感染的细胞培养上清及HIV-1p24抗原国家参考品，并同时用进口p24抗原检测试剂盒进行对比检测。结果：经细胞融合、筛选、克隆化，共获得10株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验，选A值≥2．50的2株mAb建立的双mAb夹心ELISA法，敏感性可达2．5ng／L，且与进口试剂盒检测结果的一致性良好。结论：建立了具有高度敏感性和特异性的双mAb夹心ELISA法，为研制可用于检测HIV-1p24抗原的试剂盒奠定了基础。     

抗人白细胞介素15单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的 :制备鼠抗人白细胞介素 15(hIL 15)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。方法 :自重组人白细胞介素 15(rhIL 15)基因工程菌中 ,提取融合蛋白GST IL 15,以 12 0g/LSDS PAGE分离鉴定 ,切取含有目的条带的凝胶 ,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 / 0骨髓瘤细胞常规融合 ,依次进行HAT选择培养 ,间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及克隆化。对杂交瘤细胞株的稳定性及其分泌的mAb的特性进行鉴定。另外 ,以rhIL 15包涵体蛋白 (rhIL 15IBP)免疫新西兰白兔 ,制备抗hIL 15的多克隆抗体 (多抗 )。用抗hIL 15的mAb与多抗建立双抗体夹心间接ELISA。结果 :获得 1株可稳定分泌特异性抗hIL 15mAb的杂交瘤细胞。建立了双抗体夹心间接ELISA ,检测rhIL 15蛋白的敏感性达 10 μg/L。结论 :成功地制备抗hIL 15mAb ,并建立了一种可用于hIL 15检测的双抗体夹心间接ELISA。