橙汁提取物生物制备银纳米颗粒及其生物相容性研究

目的　探索橙汁提取物生物制备银纳米颗粒产量最大化的条件；评价其银纳米颗粒的生物相容性。 方法　检测反应体系在不同pH、温度与反应时间等条件下银纳米颗粒产量变化，探索最佳反应条件；通过CCK-8试剂盒、扫描电镜和抑菌实验评价银纳米颗粒的生物相容性及抗菌性。 结果　在pH=8.0、0 ℃、反应时间为4 h条件下银纳米颗粒产量最高。制备的银纳米颗粒呈球形或椭球形，平均粒径为15.54 nm，Zeta电位为-34.46，分散良好。浓度介于6.25~50 μg/ml的银纳米颗粒对大鼠皮肤成纤维细胞和红细胞均无毒性作用。在12.5 μg/ml及以上浓度银纳米颗粒对大肠杆菌具有抑制作用，100 μg/ml及以下浓度银纳米颗粒对金黄色葡萄球菌未见明显抑制作用。 结论　在pH=8.0、0 ℃、反应时间为4 h条件下利用橙汁提取物制备银纳米颗粒产量最高，这种银纳米颗粒粒径小、分散均匀、不易团聚，具有良好的生物相容性和抗菌性。     

PGE2和NF-кB信号途径在骨再生中的相互作用

目的 本研究旨在利用MC3T3-E1成骨细胞株与大鼠骨折模型来研究骨折愈合过程中PGE2和NF-кB信号途径的相互作用.方法 利用PGE2与NF-кB抑制剂BAY 11-7082处理MC3T3-E1成骨细胞和大鼠骨折模型,采用碱性磷酸酶活性测定、Western blot分析、EMSA分析以及ELISA测定等研究手段,研究PGE2、NF-кB、BMP-7、Id2以及SOD2在骨再生中的作用.结果 利用10 μmol/l PGE2处理MC3T3-E1细胞10 min,30 min和2h后,能够显著地促进成骨细胞增殖与分化,当细胞用5μmol/L BAY 11-7082处理后,PGE2诱导作用受到抑制,表明PGE2增加ALP的表达是通过NF-kB途径来介导.局部注射NF-kB抑制剂后PGE2的生物合成明显减少;此外,抑制骨折部位ALP的活性,在骨折的损伤修复过程中,NF-кB、BMP-7以及SOD2的表达均明显上升,而Id2的表达明显下降；加入NF-кB活性抑制剂后,BMP-7与Id2的表达恢复到正常水平,而SOD2的表达没有改变. 结论 PGE2能够同时通过抑制Id2细胞因子和激活NF-кB信号途径诱导成骨细胞分化.     

前列腺素E2对MC3T3- E1成骨细胞基因表达谱的影响

目的 通过检测前列腺素E2( prostaglandins E2,PGE2)作用于MC3T3 - E1成骨细胞后基因表达谱的改变,探索PGE2促进骨形成作用的分子机制。方法 10 μmol/L的PGE2处理MC3T3 - E1成骨细胞30 min后,用基因芯片技术检测PGE2处理成骨细胞后基因表达谱的变化,选取在骨再生过程中重要的基因用Westem blot法检测验证。结果 PGE2处理成骨细胞后,276个基因表达上调,其中和骨再生有关的基因主要有单核细胞向巨噬细胞转化基因( monocyte to macrophage differentiation,MMD)、核受体基因(nuclear receptor subfamily 4,group A,member 2,NR4A2)、骨形态发生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7,BMP -7）、成骨细胞特异性因子(periostin,osteoblast specific factor,POSTN)和钙黏蛋白等;168个基因表达下调,其中和骨再生有关的基因有DNA结合抑制因子1,2,3(Id1,2,3)等。Western blot结果显示,与对照组比较,PGE2处理成骨细胞后核因子- Κb( nuclear factor - Κb,NF - Κb) p65和BMP -7蛋白表达显著上升(P＜0.01),Id2蛋白表达显著下降(P＜0.O1),与基因芯片结果基本一致。结论 结合基因芯片结果和Westem blot结果,可以推测PGE2处理成骨细胞后首先激活核受体基因NR4A2,继而引起NF - Κb的活化,最后引起下游基因BMP -7和Id2等的变化从而引起成骨细胞分化,促进骨再生。     

LPS诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖并增加NF-κB p65蛋白的表达

目的： 研究LPS-NF-κB信号通路在骨形成过程中的作用。方法: MC3T3-E1成骨细胞常规培养,待细胞融合率为80%时,分别加入100 μg/L和500 μg/L LPS处理6 h。流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞DNA相对增殖指数;RT-PCR法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达;蛋白质印迹法（Western blotting）检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65的核易位情况;电泳迁移率变动分析（EMSA）LPS处理MC3T3-E1细胞后NF-κB活力的变化情况。结果: 100 μg/L和500 μg/L LPS可诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖;LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达与正常组比较无显著变化（P>0.05）,而NF-κB p65蛋白的表达明显高于对照组（P<0.01）;LPS处理成骨细胞后免疫荧光法可明显观察到NF-κB p65从细胞质转移入细胞核,且EMSA结果显示LPS处理组细胞核内NF-κB结合活性增加。结论: 低浓度的LPS可促使成骨细胞增殖,此过程中并不影响NF-κB p65的基因表达水平,但能增加NF-κB p65蛋白的表达并提高细胞核内NF-κB的结合活性。     

PGE2 和 NF-κB信号途径在骨再生中的相互作用

目的　本研究旨在利用MC3T3-E1 成骨细胞株与大鼠骨折模型来研究骨折愈合过程中PGE2和NF-κB信号途径的相互作用。 方法　利用PGE2与NF-κB 抑制剂 BAY 11-7082处理MC3T3-E1成骨细胞和大鼠骨折模型，采用碱性磷酸酶活性测定、Western blot 分析、EMSA分析以及ELISA测定等研究手段，研究PGE2、NF-κB、BMP-7、 Id2以及SOD2在骨再生中的作用。 结果　利用10 μmol/l PGE2处理MC3T3-E1细胞10 min, 30 min 和2h后，能够显著地促进成骨细胞增殖与分化，当细胞用5 μmol/L BAY 11-7082处理后，PGE2诱导作用受到抑制，表明 PGE2 增加ALP的表达是通过NF-κB 途径来介导。局部注射NF-κB 抑制剂后 PGE2 的生物合成明显减少；此外，抑制骨折部位ALP的活性，在骨折的损伤修复过程中，NF-κB、BMP-7以及SOD2 的表达均明显上升，而Id2的表达明显下降；加入NF-κB活性抑制剂后，BMP-7与Id2的表达恢复到正常水平，而SOD2的表达没有改变。　结论 　PGE2能够同时通过抑制Id2细胞因子和激活NF-κB信号途径诱导成骨细胞分化。     

miRs在力学拉伸促进成肌细胞增殖过程中的作用

目的　探讨3种miRs在力学拉伸促进C2C12成肌细胞增殖过程中的作用。  方法　周期性拉伸的各种力学条件通过 BioFlex 加载系统实现。 采用CCK-8检测不同拉伸频率对成肌细胞增殖的影响。对促增殖拉伸组和对照组进行高通量测序, 反转录定量 PCR(qRT-PCR) 验证高通量基因测序结果,并进行生物信息学分析。   结果　 0.125 Hz拉伸组明显促进C2C12成肌细胞增殖（P<0.05）,而0.25 Hz 和0.5 Hz相比于对照组的差异无统计学意义;高通量测序分析表明,11种miRs表达于对照组和0.125 Hz拉伸组,其中差异有统计学意义的为3种：mir-44,mir-36,mir-20;qRT-PCR证实这3种miRs的表达改变与测序结果一致;这3种miRs参与了多个信号通路的调控。  结论　高通量基因测序和生物信息学分析表明3种miRs在应力诱导的C2C12成肌细胞增殖过程中有重要作用。