转铁蛋白介导作用的应用进展(文献综述)

发现转铁蛋白 (Transferrin ,Tf)已有半个多世纪 ,转铁蛋白介导的铁吸收方面也作了大量的研究工作。细胞吸收铁的主要途径是通过转铁蛋白结合铁 ,再和转铁蛋白受体 (Trans ferrinreceptor,TfR)形成复合物 ,然后内吞化形成内吞小体。内吞小体中的酸性环境使得转铁蛋白释放出铁。这时的铁可作为血红素蛋白、核糖核苷酸还原酶的辅因子或贮存在铁蛋白中。除了铁以外 ,许多治疗性与诊断性金属离子也可结合转铁蛋白的铁结合位点 ,形成复合物。由于恶性肿瘤细胞过度表达转铁蛋白受体 ,如果转铁蛋白与抗癌药物偶联 ,可明显增强该药物的选择性、毒…     

TnI(84-330bp)稳定区基因的克隆及表达

目的克隆与表达具有稳定免疫反应性的肌钙蛋白TnI（28—110aa）片段。方法（1）PCR从心脏cDNA中扩增TnI（84-330bp）与PGEX-4T-3／TnI（84-330bp）表达载体的构建；（2）IPTG诱导BL21-PGEX-4T-3／TnI（84-330bp）表达，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）判定pGEx-4T-3-Tnl84—330bp融合蛋白的表达情况，并经蛋白质印迹试验（Western Blotting）对表达产物进行验证。谷胱甘肽Sepharose-4B亲合层析柱纯化目的蛋白。结果PCR扩增出TnI（84-30bp）基因，将该基因正确地克隆到表达性载体质粒pGEX-4T-3中；可溶性表达的目的蛋白多于包涵体；肌钙蛋白Ⅰ单抗能识别融合蛋白，而与GST蛋白不发生交叉反应。结论成功构建了能在BL21中高效表达的PcEX-4T-3／TnI（84—330bp）质粒，表达的目的蛋白有特异免疫反应性。     

心肌肌钙蛋白基因中连续AGG的同义替换与GST融合表达

目的获得高表达、易纯化的GST-cTnT融合蛋白,初步探讨其免疫反应性。方法(1)PCR扩增心肌肌钙蛋白T基因cDNA及其连续稀有密码子的同义替换;(2)PGEX-4T-3/TnT-1、2、3、4的构建与GST-cTnT融合蛋白的表达和纯化;(3)WesternBlot与电化学发光cTnT测定法研究GST-cTnT融合蛋白的免疫反应性。结果成功构建了PGEX-4T-3/TnT-1、2、3、4的表达载体。BL21-PGEX-4T-3/TnT-2、3、4表达的目的蛋白高于BL21-PGEX-4T-3/TnT-1,通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析得到高纯度的融合蛋白。WesternBlot与电化学发光cTnT测定法表明表达的融合蛋白和相应的抗体相互作用,且GST蛋白不与相应的抗体作用。结论cTnT基因上的连续稀有密码子的同义替换,可提高其在E.Coli中的表达量。GST-cTnT融合蛋白中的GST蛋白不影响cTnT的免疫反应性。