联合应用多种细胞及分子细胞遗传学技术确诊额外标记染色体

目的应用比较基因组杂交技术（comparative genomic hybridization，CGH）、荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）和传统细胞遗传学技术分析1例额外标记染色体（supernumerary marker chromosome，SMC），探讨这些技术的联合使用在识别新发生的标记染色体方面的临床应用。方法1例智力低下患儿，通过常规G显带技术分析其染色体核型。针对发现的SMC，通过CGH分析其起源，通过FISH技术证实。同时应用N带和C带技术分析SMC的随体组成和着丝粒组成。结合已有的文献报道，分析该SMC的表型效应。结果染色体G带分析显示患者为携带SMC的嵌合体，核型描述为mos．47，XX，＋may[31]／48，XX，＋2mar[29]。CGH分析显示患儿基因组中有15q11→q14片段重复，以15q探针与患者中期分裂相进行FISH检测证实SMC来源于15号染色体。应用检测缺失型Prader-wiUi综合征／Angelman综合征的UBE3A探针与患者中期分裂相检测显示SMC有两个UBE3A杂交信号，对照的PML位点没有信号。N带显示SMC携带双随体，c带分析SMC为双着丝粒。综合上述结果，患者核型为：mos．47，xx，＋der（15）（pter＋q14：：q14→pter）[31]／48，XX，＋2der（15）（pter→q14：：q14→pter）[29]．ish der（15）（WCPl5＋，UBE3A＋＋，PML-）。结论CGH对于检测出不平衡染色体结构重排具有提示作用，结合FISH和传统的细胞遗传学技术，为确定SMC的结构组成提供了可信的技术平台，为分析这类异常核型个体的表型、预后和复发风险提供了依据。     

引物延伸预扩增结合简并引物PCR在单细胞比较基因组杂交分析染色体异常中的应用

目的 建立一种可信的单细胞全基因组扩增(whole genome amplification.WGA)技术,结合比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)分析单细胞的染色体拷贝数变化,探讨其在胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)中的应用前景.方法 采用引物延伸预扩增结合简并核苷酸引物PCR(primer extension preamplification with degenerate oligonucleotide primed-PCR,PEP-DOP-PCR)的方法,扩增12个已知核型的单细胞标本(包括5个绒毛标本、4个干细胞标本和3个淋巴细胞标本)和4个经PGD检测发现染色体异常的单卵裂球标本,将扩增产物标记红色荧光染料后,与标记绿色荧光染料的正常DNA等量混匀,与正常中期分裂相进行比较基因组杂交分析.同时,应用单纯的简并寡核苷酸引物-PCR(DOP-PCR)扩增10个单细胞DNA,标记后进行CGH分析.比较两种单细胞全基因组扩增方法的扩增效率及随后用于CGH分析染色体拷贝数时的准确性.结果 所有的单细胞采用PEP-DOP-PCR扩增时,均能获得稳定均匀的PCR产物,片段大小范围在100～1000 bp之间,集中分布于400 bp左右的区域,CGH分析结果显示染色体拷贝数变化与其它技术检测的结果一致.而10个单纯的DOP-PCR扩增只有6个标本成功,扩增产物进行CGH分析时,杂交信号不均匀,有2个显示与其它技术分析的结果不一致.结论 PEP-DOP-PCR技术能有效地扩增单细胞的全基因组DNA,其扩增产物可应用CGH技术成功检测单个细胞的染色体拷贝数变化,而单纯的DOP-PCR技术易于出现扩增失败、扩增产物杂交后信号不均一的缺点.PEP-DOP-PCR全基因组扩增结合CGH技术在胚胎植入前遗传学诊断中有良好的应用前景.