piggyBac转座子调节pPiggyBac-Rb质粒的构建*○

背景：外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径,piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全,在基因治疗方面具有广阔的应用前景。 目的：探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用。 方法：采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50。 结果与结论：考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率最高,荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达,MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著。结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体。关键词：piggyBac转座子;SO-RB50细胞;转染;Rb基因;基因治疗 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.20.033     

不同程度近视患者行SMILE术后的有效光学区及角膜高阶像差比较

目的：比较低、中、高度近视患者行飞秒激光小切口基质透镜取出术(SMILE)后的有效光学区和角膜高阶像差。

方法：收集2019-02/2021-02在我院行SMILE手术的患者134例,均取右眼入组,按等效球镜度(SE)分为低度近视组SE>-3.00 D,中度近视组-6.00 D结果：SMILE术后1 mo,三组术后有效光学区均小于预设光学区,随着屈光度数增加,有效光学区越小(P<0.05); 术后1 mo角膜总高阶像差、球差、彗差均高于术前,除低近视度组球差术前与术后1 mo无差异(P>0.05),其余组别均有差异(P<0.05); 角膜总高阶像差、球差和彗差随着屈光度数增加而增加,三组角膜总高阶像差和球差有差异(均P<0.05),高度近视组与中度近视组、低度近视组彗差结果均有差异(P<0.05),中度近视组与低度近视组彗差结果无差异(P>0.05)。

结论：随着手术矫正的屈光度数增加,术后有效光学区减少越多,角膜高阶像差增加越明显; SMILE术后1 mo角膜高阶像差较术前增加。     

飞秒激光小切口基质透镜取出术和飞秒制瓣联合准分子激光原位角膜磨镶术术后有效光学区及角膜像差的比较

目的:比较不同预设光学区组的飞秒激光小切口基质透镜取出术(small incision lenticule extraction,SMILE)和飞秒激光制瓣联合准分子激光原位角膜磨镶术(femtosecond laser-assisted in situ keratomileuses,FS-LASIK)术后有效光学区(...     

piggyBac转座子调节pPiggyBac-Rb质粒的构建

背景:外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径,piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全,在基因治疗方面具有广阔的应用前景。目的:探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用。方法:采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50。结果与结论:考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率最高,荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达,MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著。结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体。     

川芎嗪对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及其分子机制

目的:研究川芎嗪对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,并探讨其与趋化因子CXCR4表达水平之间的关系。方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞,经川芎嗪作用48 h后,应用MTT法检测川芎嗪对HeLa细胞增殖活性的抑制,然后采用流式细胞仪检测经川芎嗪处理的实验组与以磷酸盐缓冲液处理的对照组中HeLa细胞的细胞周期分布;应用蛋白印迹法半定量及免疫荧光实验定性检测川芎嗪处理后趋化因子受体CXCR4表达水平的改变。结果:川芎嗪对人宫颈癌HeLa细胞的增殖有明显的抑制作用,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。经川芎嗪处理后的HeLa细胞G0/G1期增多,S期细胞减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。川芎嗪能够下调人宫颈癌HeLa细胞的CXCR4蛋白表达。结论:川芎嗪对人宫颈癌细胞HeLa的增殖有明显抑制作用,其抑制作用可能与下调HeLa细胞中CXCR4蛋白的表达有关。     

川芎嗪抑制人视网膜母细胞瘤SO-RB50生长机制的研究

目的:研究川芎嗪对人视网膜母细胞瘤(RB)SO-RB50细胞增殖的影响,并探讨其作用与趋化因子CXCR4表达水平之间的关系。方法:体外培养人SO-RB50细胞,经川芎嗪处理不同时间后,应用MTT法检测SO-RB50细胞的增殖抑制;采用荧光定量逆转录PCR和蛋白免疫印迹法分别从基因和蛋白质水平检测川芎嗪对SO-RB50细胞趋化因子受体CXCR4表达的影响,进而应用流式细胞仪检测SO-RB50细胞的细胞周期分布。结果:MTT结果显示川芎嗪对人SO-RB50细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01);细胞周期结果显示川芎嗪处理后的SO-RB50细胞G0/G1期增多,S期细胞减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);通过荧光定量逆转录PCR及蛋白免疫印迹实验证明,川芎嗪能下调人SO-RB50细胞CXCR4的表达水平。结论:川芎嗪对人SO-RB50细胞的增殖有明显抑制作用,且能下调SO-RB50细胞中与肿瘤发生及生长密切相关的CXCR4表达水平。     

学龄期痉挛型脑瘫儿童汉语声韵特征及其与口部运动的相关性

目的探究学龄期痉挛型脑瘫儿童汉语声韵特征及其与口部运动的相关性。 方法用《构音语音能力评估词表》与《口部运动功能评估》对41例（6～18岁）学龄期痉挛型脑瘫儿童和30例(5～6岁)普通儿童进行评估,观察脑瘫儿童汉语声母、韵母的特征,并对下颌、唇、舌的运动与构音清晰度进行相关性检验。 结果①学龄期痉挛型脑瘫儿童声母构音正确率依次是塞擦音（68.05%）、边音（68.29%）、擦音（69.51%）、送气音（75.34%）、不送气音（82.93%）、塞音（88.62%）、鼻音（93.90%）;韵母构音正确率从低到高依次是后鼻音（75.61%）、前鼻音（77.24%）、复韵母（86.59%）、单韵母（95.82%）。②学龄期痉挛性脑瘫儿童构音清晰度与口部运动功能相关系数r＝0.678（P<0.01）。 结论学龄期痉挛型脑瘫儿童声母塞擦音正确率最低,韵母后鼻音正确率最低;且其汉语构音清晰度与口部运动功能相关。