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目的制备人源copine-8(CPNE8)蛋白的多克隆抗体。方法反转录PCR扩增HBE人支气管上皮细胞的CPNE8基因(编码CPNE8蛋白)并克隆至p GEX-4T-1原核表达载体中,所得的重组载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白。谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析纯化目的蛋白并基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF)鉴定。以纯化的CPNE8蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法检测抗体的效价和特异性。结果成功构建了p GEX-4T-1-CPNE8表达载体,重组CPNE8蛋白在大肠杆菌中高效表达。ELISA检测结果显示抗体的效价达1∶64 000;此多克隆抗体可经Western blot特异性识别原核表达的CPNE8蛋白,并可适合免疫组织化学技术检测该蛋白在人正常肺组织和肺癌组织中的分布。结论成功制备具有较好结合特异性的CPNE8蛋白多克隆抗体。 相似文献
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1临床资料
患者,女性,52岁。因“腰部疼痛、束带感伴感觉减退3年余”入院。查体:神志清楚,腹部平软,双侧瞳孔正常,四肢肌力、肌张力正常,腰部压痛,有束带感,T6-10段左侧浅感觉减退,腹壁反射存在,颈软;无大小便失禁。腰椎穿刺脑脊液检查示:外观清亮、透明,细胞数0,蛋白1.1 g/L,余正常,可排除炎性占位。胸段脊髓MRI示T9-10髓内占位,多发脊髓空洞,病变大小约18 mm ×9 mm, T1等信号,T2高信号;增强可见明显不均匀强化,考虑髓内星形细胞瘤或室管膜瘤可能性大(图1)。本例患者取T8-11正中切口,一次切开皮肤、筋膜、肌肉,暴露T8-11,咬骨钳咬除T9-10椎管后方(开骨窗大小约4 cm ×2 cm),见硬脊膜张力高,正中剪开硬脊膜,见脊髓色黄,张力高。切开T9-10椎管脊髓,见鱼肉样肿瘤组织,分块切除肿瘤,硬膜基底部的肿瘤最后切除,胸背筋膜修补缺损硬膜。术后1个月右侧腰部疼痛明显减轻。术后病理检查示:髓内脊膜瘤(图2)。复查胸椎MRI示肿瘤完全切除(图3)。 相似文献
患者,女性,52岁。因“腰部疼痛、束带感伴感觉减退3年余”入院。查体:神志清楚,腹部平软,双侧瞳孔正常,四肢肌力、肌张力正常,腰部压痛,有束带感,T6-10段左侧浅感觉减退,腹壁反射存在,颈软;无大小便失禁。腰椎穿刺脑脊液检查示:外观清亮、透明,细胞数0,蛋白1.1 g/L,余正常,可排除炎性占位。胸段脊髓MRI示T9-10髓内占位,多发脊髓空洞,病变大小约18 mm ×9 mm, T1等信号,T2高信号;增强可见明显不均匀强化,考虑髓内星形细胞瘤或室管膜瘤可能性大(图1)。本例患者取T8-11正中切口,一次切开皮肤、筋膜、肌肉,暴露T8-11,咬骨钳咬除T9-10椎管后方(开骨窗大小约4 cm ×2 cm),见硬脊膜张力高,正中剪开硬脊膜,见脊髓色黄,张力高。切开T9-10椎管脊髓,见鱼肉样肿瘤组织,分块切除肿瘤,硬膜基底部的肿瘤最后切除,胸背筋膜修补缺损硬膜。术后1个月右侧腰部疼痛明显减轻。术后病理检查示:髓内脊膜瘤(图2)。复查胸椎MRI示肿瘤完全切除(图3)。 相似文献
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