多种肿瘤传代细胞中Ig样物质存在与检测

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HL-60细胞Ig样蛋白的表达及IgH V-D-J序列分析

ＨＬ６０为髓系白血病传代细胞,在诱导分化的条件下,可向粒细胞及单核细胞分化。到目前为止,未见到该细胞可向Ｂ细胞分化及产生免疫球蛋白（Ｉｇ）的研究报道。然而,我们在探讨癌细胞内的Ｉｇ样蛋白表达情况时,偶然发现ＨＬ６０细胞内也同多种上皮来源的肿瘤细胞...     

多种肿瘤传代细胞中lg样物质存在与检测

目的：探讨lg样物质是否在多种肿瘤细胞内存在广泛的表达,筛选出lg样蛋白高表达细胞株。方法：通过免疫组织化学方法（直接法、APAAP法）,分别用抗人IgG多克隆抗体、抗人IgG重链、轻链单抗,对乳腺癌（T47－D、MCF－7）、大肠癌（HT－29、HCT－8）、卵巢癌（SKOV3、Ca）、肺癌（A549）、口腔上皮样癌（A431）、肝癌（BC－7402）、宫颈癌（S3、MR）等上皮性恶性肿瘤及部分造血系统肿瘤传代细胞（Ran、HL－60、K562）的胞浆内屹样物质进行了检测。结果：当用抗人IgG多抗进行检测时,所有的上皮性恶性肿瘤细胞同阳性对照（杂交瘤）一样,都呈阳性反应;而在造血系统肿瘤中,除Ran细胞呈弱阳性反应外,K562、HL－60为阴性反应。用抗人IgG轻、重链单抗进行APAAP法检测时,所得结果基本同直接法,但在上皮性恶性肿瘤细胞株中显示了明显的阳性强度差异,如：HeInMR、CaOV3、MCF－7、T47－D、对抗人IgG重链单抗呈强阳性反应;而HCT－8、A549、A431、BCL－7402、等细胞株为弱阳性,SKOV3则为阴性。抗人IgG。链阳性率高于λ链。结论：Ig样物质在所检测的上皮性恶性肿瘤传代细胞系中存在广泛的表达。     

三种反义c-myc逆转录病毒表达载体的纯化、病毒包装、滴工测定及整合检测

<正> 为了增强逆转录病毒构建体对靶细胞的转染能力,本实验使用Wizard~(TM)DNA纯化系统对构建成功的三种反义c-myc逆转录病毒表达载体进行了纯化,并经脂质体介导包装PA317细胞,使用NIH3T3细胞测定了PA317抗生细胞克隆的病毒滴度,用neo基因PCR扩增检测外源基因的整合情况.结果显示:1.纯化后的DNA260mm和280nm的OD值均大于1.8,且在琼脂脂糖电泳电中未有明显的RNA出现,说明DNA达到了真核细胞转染的要求,经灭菌和浓度调整后即可用于细胞转染.2.经测定,PA317的病毒滴度达到10~4级,这主要是因为病毒的感染效率不仅直接受病毒载体类型的影响,而且其包装滴度的高低还受靶细胞生长状态、PA317抽样量的高度影响.3.目的基因整合的检测;在所有抽取的转基因克隆细胞的基因组DNA中均能扩增出一条特异的、长430bp的neo基因片断电泳条带,而未转染组则无此条带.在检测基因转染后是否发生了染色体整合上,可用用Southem杂     

三种反义c-myc逆转录病毒表达载体的纯化、病毒包装、滴度测定及整合检测

为了增强逆转录病毒构建体对靶细胞的转染能力 ,本实验使用 Wizard TMDNA纯化系统对构建成功的三种反义 c- myc逆转录病毒表达载体进行了纯化 ,并经脂质体介导包装 PA317细胞 ,使用 NIH 3T3细胞测定了 PA317抗性细胞克隆的病毒滴度 ,用 neo基因 PCR扩增检测外源基因的整合情况。结果显示纯化后的DNA达到了真核细胞转染的要求 ,但其包装滴度的高低还受靶细胞生长状态、 PA317抽样量的高度影响 ,而neo基因 PCR检测是一种敏感、经济和可靠的基因整合检测法