转基因羊奶中促红细胞生成素的提纯

目的从pBLG-hEPO转基因母山羊的羊乳中提纯促红细胞生成素(EPO)。方法经过酸沉淀预处理、SPSepharose FF阳离子交换树脂、butyl FF 16/10疏水交换树脂、Superdex 75 26/60分子筛色谱4步分离,从转基因羊乳中纯化出EPO。结果经SDS-PAGE检测,得到的EPO相对分子质量约为32 000,全程回收率为10.1%,ELISA和蛋白质印迹实验证明其具有天然EPO抗原性。结论此工艺可用于快速分离转基因羊乳中EPO。     

转基因山羊乳中EPO活性检测

目的　对转基因山羊乳中 EPO的生物学活性进行检测。方法　用网织红细胞法检测体内生物活性,用ELISA法和 MTT法检测体外生物活性。结果　羊乳中 EPO体内生物学活性明显低于其体外生物学活性。结论推测我们所得的重组EPO的N糖基高分支的比例小及唾液酸化程度偏低,造成其体内生物活性下降。     

抗rhEPO单克隆抗体的制备及初步应用

目的 :研制抗人促红细胞生成素的特异性单克隆抗体 (mAb) ,对其生物学特性进行初步鉴定 ,并用于转基因羊乳中重组人促红细胞生成素 (rhEPO)的提纯。方法 :以自制的rhEPO粗品免疫BALB/c小鼠 ,制备抗rhEPO的mAb。以Westernblot和间接ELISA法 ,对所获mAb进行初步鉴定。以纯化的mAb同预活化的Sepharose 4B偶联 ,制得mAb亲和层析柱 ,并用于转基因羊乳中rhEPO的提纯。结果 :获得两株可分泌特异性抗rhEPO的mAb的杂交瘤细胞株 (1E7和 2E6 )。Ig亚类 (型 )的鉴定分别为IgG1和IgG2b ,轻链均为κ型。用Westernblot证实 ,获得的mAb可特异性地识别rhEPO。用自制的免疫亲和层析柱用于转基因羊乳中rhEPO的提纯 ,具有很好的吸附作用 ,回收率达 70 %。结论 :成功地获得两株可分泌特异性抗rhEPO的mAb的杂交瘤细胞。用自制的免疫亲和层析柱提纯转基因羊奶中的rhEPO具有较高的吸附效率     

弗林蛋白酶(furin)多肽抑制剂的合成研究

目的以绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)Lys活性片段22肽为模板,设计能抑制弗林蛋白酶(furin)的多肽抑制剂。方法根据furin的专一性底物的特定氨基酸序列来改造设计抑制剂,用Fmoc法固相合成了两条多肽抑制剂(MBI 13和MBI 14)。结果纯化的MBI13和MBI14经HPLC和质谱鉴定合成正确,对furin的抑制常数分别为:5.6×10-7M和2.3×10-7M。结论以MBTI Lys片段为模板经过突变和优化设计,得到了较为理想的furin抑制剂,为进一步的药物设计提供依据。