THE INTRACELLULAR FORM OF EPSTEIN-BARR VIRUS GENOME IN NASOPHARYNGEAL CARCINOMA

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鼻咽癌中p53基因突变的研究

目的：探讨鼻咽癌中ｐ５３基因突变情况。方法：用非同位素不对称ＰＣＲ－单链构象多态性技术（ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ），分析了鼻咽癌活检组织、细胞株和裸鼠移植瘤中ｐ５３基因第５、６、７和８外显子（ｅｘｏｎ）的基因突变，并对其中ｅｘｏｎ８突变的ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１进行ＤＮＡ测序。结果：在２０例鼻咽癌活检组织中没有发现突变；但在鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２、ＳＵＮＥ－１和瘤株ＳＵＮＴ－１中存在第８外显子突变，而ＨＫ１为第５外显子突变。ＤＮＡ测序发现ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１的突变点在ｅｘｏｎ８的密码子（ｃｏｄｏｎ）２８０上，由ＡＧＡ（精氨酸）→ＡＣＡ（苏氨酸）。结论：ｐ５３基因突变热点的ｅｘｏｎ５、６、７和８可能在鼻咽癌变过程中没有重要意义，而在裸鼠移植瘤和细胞株建立过程中起重要作用。ＥＢＶ由于和鼻咽癌的关系密切，在鼻咽癌中可能存在ＥＢＶ编码蛋白与ｐ５３结合或蛋白表达被ＥＢＶ抑制等其他途径使ｐ５３失活。     

转入IL-18 cDNA的鼻咽癌细胞在hu-PBL-SCID鼠中致瘤性的影响

为了探讨人白细胞介素 18(hIL 18)的表达对鼻咽癌细胞体内致瘤性的影响 ,我们构建了hIL 18的真核表达载体pcD NA3/hIL 18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE细胞 ;然后以转染阳性的SUNE细胞和未转染的SUNE细胞接种到用健康人外周血白细胞免疫重建的SCID鼠 (hu PBL SCID鼠 ) ,观察成瘤情况。结果发现 ,所构建的真核表达载体在鼻咽癌细胞中能高效表达hIL 18;ELISA法测得转染阳性细胞培养上清液中hIL 18的含量为 (85± 10 )pg/ml,而未转染的SUNE细胞的培养上清液中hIL 18的含量低于 5pg/ml。将转染阳性的细胞克隆和未转染的SUNE细胞接种hu PBL SCID小鼠后连续观察 5 0d ,发现前者形成的肿瘤其生长速度明显慢于后者 ,其平均瘤重也有显著性差异 (P <0 0 0 1)。说明在体内hIL 18的表达能有效地抑制鼻咽癌细胞的成瘤作用。     

鼻咽癌裸鼠移植瘤及其相应体外细胞株的建立与特性研究

从新鲜鼻咽活检组织建立了一株鼻咽癌（ＮＰＣ）裸鼠移植瘤株（ＳＵＮＴ一１）及其相应的体外传代上皮细胞株（ＳＵＮＥ一１）。证实ＳＵＮＴ一１和ＳＵＮＥ一１为典型低分化鳞癌细胞，染色体分析二者均为人类肿瘤核型。以ＰＣＲ技术检测ＳＵＮＴ一１的Ｐ１～Ｐ１８和ＳＵＮＥ一１直到第６１代培养的细胞中的ＥＢＶ一ＤＮＡ均为阳性。用原位溶细胞电泳技术（Ｉｎｓｉｔｕｌｙｉｎｇｇｅｌ）ＥＢＶ探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，亦显示相应的ＥＢＶＤＮＡ区带。ＥＢＶ基因组为线性特征，且在ＳＵＮＴ一１Ｐ１８和ＳＵＮＥ一１Ｐ５３细胞的电镜检查中均发现直径为９６一１００ｎｍ的ＥＢＶ样颗粒。用不对称ＰＣＲ一ＳＳＣＰ检测，显示有Ｐ５３第８外显子突变。带ＥＢＶ基因的ＮＰＣ瘤株及相应的上皮细胞株建立，为从分子水平、细胞水平上研究肿瘤的发生发展过程，以及治疗等方面提供了丰富的和更切合人体肿瘤的材料和模型。     

鼻咽癌细胞系SUNE中EBV-LMP1基因对上皮细胞增殖的影响

目的研究鼻咽癌细胞系ＳＵＮＥ中ＥＢＶ┐ＬＭＰ１基因对上皮细胞增殖的影响,探索ＬＭＰ１在鼻咽癌发生中所起的作用。方法用ＬＭＰ１基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞,检测ＬＭＰ１的表达,观察细胞在软琼脂中的集落形成能力,ＭＴＴ吸收能力以及ＰＣＮＡ的表达情况。结果被ＬＭＰ１基因转染的细胞生长旺盛,能在软琼脂中形成多个集落,ＭＴＴ吸收能力增强,ＰＣＮＡ的表达水平增高。结论ＬＭＰ１基因能明显改变上皮细胞的生物学行为,促进细胞的生长、增殖和转化,使转染的上皮细胞获得肿瘤细胞的生长特征。     

武汉地区不同年龄组巨细胞病毒抗体的研究

为便于与WHO组织调查CMV抗体情况比较,采用AD169株作补结抗原,检测武汉地区各年龄组正常人血清中补结抗体595例,结果2~3月婴儿阳性率低(29.41%),与国外资料相近,但4~6月小儿阳性率(78.57%)显著高于国外大多数国家的。25岁以上年龄组阳性率显著高于以下的,P<0.001。男女性别间,5岁以前各年龄组差异不显,P>0.3。5岁以上各年龄组,女性均高于男性,P<0.001。女性15岁以上组阳性率显著高于以下者,P<0.001。脐血阳性率和女性15~39岁各年龄组,差异不显著,P>0.3。
本资料说明我国CMV感染较普遍,各年龄组均有,这对进一步探索CMV致胎儿畸形提供了依据。     

宫颈疾患中人巨细胞病毒抗原及其血清抗体的检验

 应用补体结合试验(CFT)及免疫酶标玻片法(IPA)对宫颈癌高发区的正常妇女和宫颈癌低发区正常妇女,宫颈糜烂及宫颈癌病人血清人巨细胞病毒(CMV) IgG抗体进行了测定,并用过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)法检测了宫颈疾患活检组织中的CMV抗原;结果表明,宫颈癌高发区的正常妇女、低发区宫颈糜烂和宫颈癌病人血清CMVIgG抗体滴度的几何均数(GMT)均比低发区正常人高,经统计学处理差别具有高度显著性(P<0.01);IPA法与CFT法的检测结果相符,但IPA法较CFT法敏感;CMV抗原的检出率在宫颈糜烂为30%,宫颈癌为36%。实验结果提示,宫颈疾患中CMV感染较普遍,宫颈癌的发生可能与CMV有关。     

唾液中EB病毒抗体检出用于早诊鼻咽癌的研究

目的：建立在唾液标本中检出 EB病毒 IgA抗体的方法,以快速、特异诊断鼻咽癌。方法：人工合成 EBV-DNA酶及 EA-D多肽片段,分别作为捕捉抗原,采用 ELISA法检测鼻咽癌患者和健康人血清及唾液中 IgA/ EBV-DNA酶和 EA-D抗体。结果：通过检出 O.D值,经统计学处理,选出鼻咽癌诊断阈值为：血清 O.D值≥ 0.3,唾液 O.D值≥ 0.45（ DNA酶与 EA-D两者阈值一致）。鼻咽癌与健康者两组间 DNA酶与 EA-D的 IgA滴度均为 P< 0.0001,有非常显著性差异,与病理确诊相比,阳性符合率为 72.6％～ 77.3％。结论：证实 EBV合成肽链作为捕捉抗原,唾液为标本,用 ELISA法是可行的,方法简便,重复性好,价廉,但诊断符合率需进一步提高。     

鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因序列的测定

目的： EB病毒 (Epstein-Barr virus,EBV)存在的变异影响到其生物学功能（如 LMP1基因）。 BamHI A区右向框 0（ BamHI A rightward fram0, BARF0）是在鼻咽癌 (Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)病人中检出率很高的一个 EB病毒基因,对其变异性的研究尚未见报道,本研究是为了明确广东鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因的序列及其变异。方法：应用 PCR技术从 20例鼻咽癌组织中,扩增 EBV基因 BARF0,并对它们的序列进行测定。结果：与标准株 B95-8相比,鼻咽癌组织中 EBV-BARF0均有 4个位点发生突变： 160473（ G→ T）、 160545（ C→ T）、 160701（ C→ A）、 160707（ G→ C）,并导致相应的氨基酸的改变： 2（ Ala→ Ser）、 26（ Leu→ Phe）、 78（ Arg→ Ser）、 80（ Ala→ Pro）。结论：由于 EBV的 BARF0基因在鼻咽癌细胞株及活检组织中 100％表达,在淋巴瘤组织及淋巴瘤细胞株中表达较低或不表达,本研究首次报道鼻咽癌组织中 EBV-BARF0的序列分析,与 B95-8相比存在变异,并导致了蛋白质的一级结构的改变,推测该基因很可能在鼻咽癌变过程中起着重要的作用。     

鼻咽癌血清中EB病毒核抗原-1和核抗原-2抗体的研究

用抗补体免疫荧光法检测鼻咽癌患者和对照人群中EB病毒核抗原-1(EBNA-1)和EB病毒核抗原-2(EBNA-2)抗体的水平。鼻咽癌组中两种抗体滴度都升高,以EBNA-1抗体上升明显;且EBNA-1抗体与总EBNA抗体水平的变化趋势相一致。鼻咽增生性病变组中EBNA-2抗体略占优势,该组中EBNA-2抗体水平升高可能与潜伏状态的EB病毒激活或再感染的早期阶段有关。