Amadori糖化白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油--蛋白激酶C级联的影响

目的 :探讨Amadori糖化血清白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油 (DAG)———蛋白激酶C(PKC)信号级联的影响及d-α-生育酚的干预作用。方法 :体外制备的Amadori糖化的牛血清白蛋白 (AGSA)分别在生理浓度葡萄糖 (5 .5mmol/L)和高浓度葡萄糖 (2 0mmol/L)培养液中作用于新鲜牛视网膜血管。采用薄层层析和放射自显影法测定DAG含量和PKC活性 ;并检测d -α-生育酚预处理后DAG、PKC改变。结果 :在生理葡萄糖浓度下 ,牛视网膜血管暴露于AGSA2 4h或 72h后细胞内DAG含量、PKC活性均较对照组显著增加 ,当AGSA和高葡萄糖同时作用于牛视网膜血管时 ,DAG -PKC级联显著激活 ,分别为正常葡萄糖组的 3.4 7倍和 4 .5 4倍 ;在正常血清培养液中 ,与 5 .5mmol/L的葡萄糖相比 ,2 0mmol/L高糖在 2 4h时并不刺激DAG含量增加 (P >0 .0 5 ) ,而 72h时则较对照组增加 4 5 % ,PKC活性较对照增加 5 6 % ,而d -α -生育酚可逆转上述生化改变。结论 :Amadori糖化血清白蛋白可在生理葡萄糖浓度下刺激DAG -PKC途径活化 ,从而影响血管一系列生理功能 ,而d -α-生育酚对血管生化改变有保护作用。     

浅议病理生理学教学改革

本文从病理生理学理论和实验教学两个方面论述了病理生理学方法的改革与实践。教学模式变学生被动为自主学习，在传授知识同时注重培养学生自学创新能力。     

肿瘤血管内皮细胞和成纤维细胞表达血管形成因子

目的 :探讨肿瘤血管内皮细胞和成纤维细胞在肿瘤血管形成中的作用。方法 :对肿瘤血管内皮细胞和成纤维细胞模型ECV304 -SKOV3和L929-H22 细胞 ,用免疫细胞化学测定促进血管形成因子的表达、RT -PCR测定其端粒酶活性 ,并与亲代细胞比较。结果 :ECV304 -SKOV3细胞和L929-H22 细胞的端粒酶活性明显强于亲代细胞ECV304、L929,分别为0.778±0.011、0.875±0.026、0.692±0.014、0.684±0.012(P<0.001)。ECV304 -SKOV3细胞表达血管形成因子MMP -9、bcl -2增强 (P<0.05) ,TN减弱(P<0.05) ;L929-H22 细胞表达MMP -9、TGF -β1、TN、bcl-2增强 (P<0.01) ;二者表达PCNA增强 (P<0.01)。结论 :肿瘤血管内皮细胞和成纤维细胞存活能力、血管形成因子表达增强 ,可能参与肿瘤血管生成。     

土贝母皂苷体外诱导SW480细胞凋亡作用

目的探讨土贝母皂苷甲、丙对于SW 480肿瘤细胞的体外诱导细胞凋亡作用机制。方法通过光镜或电镜观察药物干预后SW 480细胞形态改变;采用流式细胞仪测定FITC-Annexin V/PI双标记后SW 480细胞凋亡早期信号;用免疫细胞化学的方法观察药物对细胞中Bc l-2,p53,Fas蛋白表达的影响。结果药物组与对照组比较,从细胞形态中观察到细胞凋亡的特征结构;用流式细胞仪检测到凋亡细胞和坏死细胞数量均有增加;免疫细胞化学检测表明土贝母皂苷是通过抑制Bc l-2,p53基因和上调Fas基因表达诱导细胞凋亡。结论土贝母皂苷甲、丙能够诱导SW 480细胞凋亡,这可能是土贝母皂苷抗肿瘤作用的途径之一。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抗增殖作用

目的:探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制增殖作用及其机制.方法:采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对SKOV3的抑制增殖效应,流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率,透射电镜观察细胞的超微结构变化,免疫细胞化学法检测凋亡相关基因蛋白的表达.结果:姜黄素可抑制SKOV3细胞的生长,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系,72h的中效浓度(IC50)为79.96μmol/L,流式细胞仪分析证实姜黄素能使SKOV3细胞聚积在G2/M,电镜观察发现姜黄素可诱导细胞凋亡,姜黄素作用72h后,免疫细胞化学表明突变型P53蛋白(MTP53)及Bcl-2表达减弱,Bax及Fas表达增强.结论:姜黄素对SKOV3细胞有抑制增殖作用,通过下调MTP53、Bcl-2的表达及上调Bax、Fas的表达而诱导细胞凋亡.     

大鼠皮层神经元原代培养方法的改进

目的:建立一种简单、较理想的新生大鼠皮层神经元体外原代培养方法.方法:采用低浓度、短时间胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮层神经元悬液,进行培养.结果:在体外培养条件下神经元结构特征明显,并能形成典型的神经元网络.结论:本方法适合普通实验室进行大鼠皮层神经元体外培养.     

小鼠可移植性肝癌(H615)与骨髓瘤细胞(NSl)染色体核型分析

H615瘤细胞含有正常数量的染色体,其众数为40,G、C显带均未见其结构异常。NSI体外培养细胞株染色体众数为65,有二种标记染色体,即中部着丝点染色体及微小染色体。中部着丝点标记染色体在G、C显带时均能证实是由二条端部着丝点染色体融合而成     

Genistein对人肝癌细胞SMMC-7721的抗增殖作用

目的：探讨Genistein对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制增殖作用及其机理。方法：采用MTT法测定Genistein在不同浓度、不同时间对SMMC-7721细胞抑制增值的效应;流式细胞术分析细胞周剧期分布及凋亡率;透视电镜观察细胞超微结构改变;免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果：Genistein可抑制SMMC-7721细胞的增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系;72h的IC50为29．0760μmol／L;流式细胞仪分析证实Genistein能使SMMC-7721细胞聚积在G2／M期,凋亡率为8．81％（P〈0．05）;透视电镜观察发现Genistein能诱导细胞凋亡;免疫细胞化学法显示：Bax、Fas、Myc、iNOS、NF—kB表达增加,Bcl-2、MTP53表达减低、结论：Genistein在体外可抑制SMMC-7721细胞增殖作用,是通过细胞阻滞在G2／M期和上调Bax、Fas、Myc、iNOS、NF—kB的表达及下调Bcl-2、MTP53表达诱导的细胞凋亡.     

顺铂、氧化苦参碱对肝癌QGY细胞生长及端粒酶活性的影响

目的：观察顺铂、氧化苦参碱对人肝癌细胞株QGY端粒酶活性的影响,进一步探讨两种药物的可能作用机制。方法：采用人肝癌细胞株QGY作为研究对象,MTT法检测不同浓度和作用时间的药物对细胞增殖的抑制作用,以及对QGY细胞粘附能力的影响;流式细胞仪分析细胞周期的分布及凋亡;PCR—ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果：两种药物均具有抗QGY细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导凋亡及抑制端粒酶活性的作用。结论：对端粒酶活性的抑制可能是两种药物发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

微血管内皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向心肌样分化及其移植的可行性

背景：骨髓间充质干细胞通过再生心肌细胞在心肌损伤性疾病治疗方面突显较大潜力,但目前仍未找到一种理想的诱导方式。 目的：探讨微血管内皮细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的潜能,并分析其移植的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察及体内移植实验,于2008-07/2009-02在重庆市神经病学重点实验室完成。 材料：清洁级二三月龄健康雄性SD大鼠16只,购自重庆医科大学实验动物中心 方法：孔径0.4 µm的transwell小室,置入培养板孔构成双室培养体系。取SD大鼠1只,Ficoll密度梯度+贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,组织块法分离培养微血管内皮细胞。培养瓶中融合至50%生长良好的微血管内皮细胞,每3 d更换培养液,收集更换液过滤即制成条件培养液。体外实验分为4组：直接接触组、双室培养组、条件培养液组、培养液对照组,观察各种培养条件对骨髓间充质干细胞的心肌诱导效应。取SD大鼠15只建立心肌梗死模型,冠状动脉结扎后第6天任取1只大鼠明确心肌梗死建模是否成功,其余大鼠随机分为细胞移植组8只、模型对照组6只。造模1周后,细胞移植组将在双室模型中与微血管内皮细胞共培养5 d的骨髓间充质干细胞调整浓度为109 L-1,通过鼠尾静脉缓慢注入1 mL,模型对照组予等量DMEM,观察4周。 主要观察指标：体外实验通过免疫荧光染色检测心肌标志物TnI、α-actin的表达;采用心电图、荧光镜检、苏木精-伊红染色等方式评价体内移植的安全性及可行性。 结果：直接接触组、双室培养组、条件培养液组部分骨髓间充质干细胞心肌标志物TnI、α-actin阳性表达,荧光镜下胞浆发绿光(或红光),前2组诱导率基本相似(P > 0.05),且均明显高于条件培养液组(P < 0.05);培养液对照组细胞未向心肌样细胞分化。细胞移植后两组大鼠均存活良好,未出现死亡及恶性心律失常,4周后细胞移植组心脏冰冻切片荧光镜检显示心肌内有少量胞核蓝染的细胞,提示干细胞成功归巢,结合苏木精-伊红染色,归巢细胞位于心肌梗死灶周边区域,呈单个或小团聚集;而模型对照组心肌切片未见胞核蓝染的细胞。 结论：微血管内皮细胞能够通过旁分泌途径诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,经微血管内皮细胞预处理过的骨髓间充质干细胞移植入大鼠体内是安全的,可成功归巢到大鼠心肌梗死灶及周边区。