鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原基因的分子克隆与基因 …

从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株，经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、有组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定，对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原Ｓ１基因进行了分子克隆及基因分型；ＲＴ－ＰＣＲ扩增病毒Ｓ１基因，将Ｓ１基因５’和３‘端分别进行分子修饰之后插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄⅢ位眯，在Ｅｃｏｌｉ中实现了目的     

鸡MxA基因的克隆、表达及生物学活性检测

目的：克隆鸡MxA基因，构建其原核表达质粒，并诱导其在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法：采用RT-PCR方法从鸡成纤维细胞（CEF）中扩增MxA，将其克隆至克隆载体pMD18-T中，筛选阳性克隆后回收目的片段，将其克隆人原核表达质粒pGEX-6p—1，构建其重组表达质粒pGEX—MxA，以IPTG诱导表达，经SDS—PAGE、鸡胚新城疫病毒干扰试验和VSV-CEF微量细胞抑制试验进行分析、鉴定。结果：经RT—PCR扩增获得的MxA序列与GeneBank报道的序列一致，SDS—PAGE和干扰试验证实重组质粒可以表达出相应分子量为45000的蛋白，与GST—MxA融合蛋白分子量一致。结论：成功完成了鸡MxA基因的克隆及其原核表达质粒的构建，在大肠杆菌DIL5ct中经IPTG诱导表达了融合蛋白GST—MxA，为进一步探讨MxA的生物学活性，探索抗病毒药物的研发奠定了基础。     

鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原基因的分子克隆与基因分型

从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株，经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定，对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原Ｓ１基因进行了分子克隆及基因分型；ＲＴ－ＰＣＲ扩增病毒Ｓ１基因，将Ｓ１基因５′和３′端分别进行分子修饰之后插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨⅠ／ＨｉｎｄⅢ位点，在Ｅｃｏｌｉ中实现了目的基因的克隆；利用英国病毒株Ｓ１全基因核酸探针与流行株Ｓ１基因的重组克隆质粒分子杂交及目的基因５′端高变区核苷酸序列分析鉴定后，采用ＨａｅⅢ、ＰＶＵⅡ和ＸｂａⅠ等限制性核酸内切酶酶切分析不同流行株Ｓ１基因ｃＤＮＡ。结果表明，我国流行的鸡传染性支气管炎病毒分为６个主要的基因型；试验发现除与Ｍ４１和澳大利亚Ｔ株相近基因型毒株之外，我国流行的毒株存在明显的分子水平的变异，这与病毒血清型鉴定的结果一致，鸡传染性支气管炎病毒中国流行毒株免疫原基因Ｓ１的分子克隆及基因分型为该病毒分子流行病学及病毒遗传变异的主要分子基础的深入研究奠定了基础。     

三类细菌基因组和CpG ODN作为禽流感病毒H5N1亚型灭活油乳苗佐剂的研究

目的：通过两种免疫策略比较三类细菌基因组和CpG ODN对禽流感病毒（AIV）H5N1灭活油乳苗的影响。方法：苯酚氯仿法抽提革兰氏阴性致病菌（大肠杆菌O2）、阳性致病菌（金黄色葡萄球菌）和阳性益生菌（粪链球菌FQ68）的基因组,并人工合成CpG ODN作为AIV油乳苗的佐剂,分佐剂与油苗分开和油裹于油苗内两种途径免疫鸡群,检测血凝（HI）抗体效价、HA抗原特异性IgG效价、IL-10和IFN-γ浓度。结果：当佐剂与油苗分开免疫时,各佐剂在所有的时间点上削弱（P〉0.05）或者显著地削弱（P〈0.05）HI和血清IgG效价,稍稍提高IL-10和IFN-γ浓度（P〉0.05）;当佐剂油裹于油苗里时,CpG ODN和FQ68基因组在所有的时间点上提高（P〉0.05）或者显著地提高（P〈0.05）HI和IgG效价以及IFN-γ浓度,其中CpG ODN好于FQ68基因组,但是都降低了IL-10浓度。结论：当CpG ODN或FQ68基因组油裹在AIV油乳苗里时能提高体液、Th1型免疫水平;当佐剂和油苗分开免疫时,则免疫佐剂性不佳。     

酶法及半仿生法提取银杏黄酮的工艺研究

为优选银杏叶中黄酮提取最佳工艺,以黄酮含量为考察指标,对酶法和半仿生法两种提取方法进行了比较。酶法提取的最佳工艺条件为:以乙醇-水作为提取液,提取液浓度80%,固液比1:20(g/mL),酶解温度为45℃,提取液pH为8.0;每5g银杏叶中加入纤维素酶4.5mg,酶解2h后,升温至90℃,每次2h,提取3次。在此条件下,银杏叶总黄酮提取量为6.3676mg·g-1。半仿生法提取的最佳工艺条件为:以乙醇-水为提取液,提取液浓度80%,提取温度80℃,固液比1:20(g/mL)。在此条件下,银杏叶总黄酮提取量为6.4598mg·g-1。