羧胺三唑抑制佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞产生细胞因子

目的探讨羧胺三唑(CAI)体外对佐剂性关节炎(AA)大鼠腹腔巨噬细胞产生细胞因子的影响。方法采用弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型,无菌制备大鼠腹腔巨噬细胞,加CAI(10、20和40μmol/L)体外培养;ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量;荧光定量PCR法检测细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达;Trans AM试剂盒检测核蛋白NF-κB p65的DNA结合活性。结果 CAI(20、40μmol/L)能够明显降低AA大鼠腹腔巨噬细胞培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平,减少细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达,同时也能够抑制核内NF-κB p65的DNA结合活性(P0.05,P0.01)。结论 CAI可能通过抑制NF-κB的活性而减少AA大鼠腹腔巨噬细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎细胞因子的产生,CAI的抗关节炎作用可能与上述机制有关。     

小鼠颌下腺上皮细胞的体外培养及鉴定

目的建立小鼠颌下腺上皮细胞的体外培养方法,探究细胞的最佳分离和培养条件,为干燥综合征等唾液腺相关疾病的研究和药物评价提供体外实验模型。方法用Ⅳ型胶原酶消化分离小鼠的颌下腺细胞;锥虫蓝染色法测定细胞存活率;差速贴壁法纯化细胞。以含有10μg/L表皮生长因子的F-12/DMEM培养液进行培养,光学显微镜观察细胞形态;增殖曲线评估细胞增殖特性;免疫荧光染色法鉴定细胞。结果经胶原酶消化法所获得的细胞存活率为97.5%;镜下观察显示细胞为典型的上皮样,呈多边形,铺路石样排列;根据增殖曲线,细胞增殖能力良好,一般能传3代;免疫荧光结果显示,cytokeratin 8表达阳性,vimentin表达阴性,符合唾液腺细胞的表型特征。结论本实验成功建立了小鼠颌下腺上皮细胞的原代和传代培养方法,方法简便易行,这为进一步实验研究提供了技术基础。