自配血细胞分析仪试剂除微粒方法探讨

自配血细胞分析仪试剂除微粒方法探讨段丹丽熊英赵兴梅四川省肿瘤研究所（６１００１２）四川省肿瘤医院（６１００１２）在进口自动血细胞分析仪日益普及的今天，许多临床检验工作者都在努力寻找配制既符合仪器要求又简单易行的试剂的方法，用以替代部份进口产品。配制试...     

两种机型的流式细胞仪测定CD4T细胞计数的比较研究

目的多种流式细胞仪机型应用于艾滋病防治工作中，比较不同机型间的免疫数据乃是当前迫切需要解决的问题。方法应用BDFACS Calibur和Beckman Coulter XL两种主流机型流式细胞仪，对阜阳市现场采集的183份标本[正常人41份，艾滋病病毒（HIV）阳性感染者142份]进行平行检测，观察上述两种机型对检测同一标本CD4绝对计数的影响。结果BD和XL两种机型的绝对计数结果比较显示，正常人CDd绝对计数在两种机型间的差异范围：≤10％的占57％，而〉10％占43％；检测142份HIV阳性标本，CD4绝对计数差异≤10％的占84％；而差异〉10％的占16％。在正常人标本组两机型数据间相关系数r=0．97；HIV阳性标本组数据间相关系数r=0．98，回归方程X系数均接近1。统计学检验显示，两种机型检测数据无显著性差异（P〉0．05）。结论两种机型间数据高度相关且数值相近．所测定的HIV感染者CD4细晌绡对计数可以百用．     

8q24 rs1447295基因多态性与不同族群前列腺癌易感性的Meta分析

目的通过Meta分析系统评价8q24染色体rs1447295基因多态性与不同族群前列腺癌(prostate cancer,PCa)患病风险的相关性。方法检索万方、中国知网、PubMed、Science Direct、Web of Science、Wiley Online Library和中国生物医学文献数据库中涉及8q24 rs1447295基因多态性和PCa易感性的病例-对照研究。2位独立研究者按标准筛选文献,运用Cochrane工具及Stata 15.0软件行Meta分析,计算OR值、95%CI并进行偏倚风险评价。结果最终纳入相关文献36篇,涉及研究41项,包含25715例PCa患者和27018例健康对照者。结果显示,在5类基因模型中,等位基因模型、显性遗传模型、隐性遗传模型、纯合子遗传模型与杂合子基因模型显示8q24 rs1447295基因多态性均与PCa易感性之间存在显著相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步亚组分析显示,在高加索人种和亚洲人种中,8q24 rs1447295基因多态性与PCa易感性相关,且差异均有统计学意义(P<0.05),在非裔和拉美裔群体中未显示有统计学关联。结论8q24染色体rs1447295基因多态性与PCa患病风险有关,该相关性在高加索人种和亚洲人种中较为显著,在非裔和拉美裔群体关联性无显著差异。     

HSV-1载体在小鼠及猴体内抗体检测方法的建立

目的为了对以HSV-1为载体的基因工程产品在动物体内药物安全评价检测抗体的需要建立一套ELISA检测方法。方法将重组HSV-1抗原作为包被抗原,对HSV-1抗原的最佳包被稀释度、包被效率、阴性和阳性血清标本的最佳稀释度进行了考察。并根据建立的检测方法,对2种动物(Balb/c小鼠和恒河猴)在给予HSV-1载体后得到的阴性血清(小鼠:30份;恒河猴:24份)和阳性血清(小鼠:120份;恒河猴:96份)进行了血清抗HSV-1抗体检测。结果(1)HSV-1抗原的最佳包被稀释度为1∶800(4.5μg),包被效率为82%;(2)阴性和阳性血清标本的最佳稀释度均为1∶100;(3)用所建立的检测方法,能够较好的在小鼠和恒河猴的阳性血清中检测出抗HSV-1的抗体。结论该方法能全面满足以HSV-1为载体的基因工程产品在药物安全评价中抗体的检测需要,该检测方法的建立能够为该类产品或相关基因工程产品的药物安全评价研究中抗体的检测分析提供一定的参考依据。     

He-Ne激光照射对离体人外周血淋巴细胞产生微核的影响

激光在临床上应用比较广泛,为探讨其细胞遗传学效应,我们用ＨｅＮｅ激光照射离体人外周血淋巴细胞,观察了淋巴细胞微核率的变化,现报告如下。材料和方法取育龄妇女微量外周静脉血,肝素抗凝。血样分5组,其中4组(激光Ａ～Ｄ组)用ＨＪＺⅡ型ＨｅＮｅ医疗激光器行激光照射,采用点状照射,光纤末端输出功率6ｍＷ,光斑直径4ｍｍ,照射距离4ｍｍ,分别照射5、10、20、40ｍｉｎ,能量密度分别为1431、2862、5724、11452Ｊ/ｃｍ2;另1组为对照组。每组重复4次。取处理后的血样05ｍｌ,加入装有培养液(配方:基础培养液ＲＰＭＩ164016ｍｌ,小牛血清04ｍｌ,植…     

甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒行业标准的验证

目的规范和提高甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）的质量,提出本行业标准并加以验证。方法使用市场上4家试剂盒对本标准的外观、阳性和阴性参考品符合率、最低检测限、重复性和稳定性等项目进行试验验证。结果除试剂盒D（北京金豪制药股份有限公司生产）外观和重复性项目不符合外,其他试剂盒的验证结果均符合标准的规定。加速稳定性试验结果显示,试剂盒A（中山大学达安基因股份有限公司生产）检测重复性参考品R2和25℃下放置2d条件下出现较多不合格结果,其他产品均符合标准规定。结论多数试剂盒的验证结果符合行业标准的要求,说明本标准整体具有合理性。本标准的建立有利于进一步规范和提高该类产品的质量,为将来核酸检测试剂盒加速稳定性条件的探索工作提供了依据。     

HIV复制型痘苗病毒载体疫苗免疫原性分析

目的 分析比较HIV复制型痘苗病毒载体疫苗在小鼠和家兔体内的免疫原性。方法 HIV痘苗病毒载体疫苗vTKgpe以肌内、皮下、皮内3种途径接种小鼠，每周采血检测HIV特异性抗体和针对痘苗病毒载体的抗体，4周时取脾细胞用流式细胞仪检测细胞免疫。此外vTKgpe皮内途径接种2只家兔，每周采血检测抗体。结果 肌内和皮下免疫的小鼠在2周时开始出现HIV特异性抗体，4周时开始消失；针对痘苗病毒载体的抗体滴度在4周时急剧升高；血清吸附实验表明痘苗病毒抗体的升高对HIV特异性抗体检测有一定的掩盖。细胞免疫仅在皮内免疫的小鼠中检测到。家兔的HIV特异性抗体在2周时出现，并能维持一段时间。结论 在小鼠体内，肌内和皮下注射2种途径倾向于诱导体液免疫，而皮内接种则以诱导细胞免疫为主。家兔对痘苗病毒的敏感性要高于小鼠。     

运用实时荧光定量RT-PCR和ELISA方法定量检测SHIV的对比分析

目的建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)的RNA载量检测方法,通过与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较,成为监测SHIV病毒体外复制过程的常用方法。方法体外转录制备RNA标准品,利用TaqMan EZ逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒的反应体系和针对SHIV gag保守区91个碱基的Taq-Man探针与引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR。三种SHIV感染性分子克隆体外转染293T细胞,在不同的时间点采样,通过实时荧光定量RT-PCR和ELISA两种方法监测SHIV病毒复制过程。结果两种方法监测的病毒复制过程基本一致,转染后2~48小时病毒复制出现明显的对数生长期,之后进入平台期,p24浓度大约103pg/ml,而RNA载量大约在108拷贝/ml。两者具有很好的相关性(r2=0.834;P<0.001)。实时荧光定量RT-PCR灵敏度更高,检测范围更广,费用更低。结论所建立的一步法检测SHIV病毒载量的实时荧光定量RT-PCR方法,可以作为监测SHIV体外扩增的常用方法。     

回生口服液对人IL-2水平及LAK细胞活性的影响

目的探讨回生口服液对人体ＩＬ２水平及ＬＡＫ细胞活性的影响．方法取健康献血者外周静脉血，分离出单个核细胞（ＰＢＭＣ），加入植物血凝素（ＰＨＡ），于９６孔微量培养板中，分别加入不同浓度的回生口服液，孵育２４ｈ，以ＣＴＬＬ２细胞作为检测细胞，用ＭＴＴ法测定ＩＬ２水平，同时设空白对照及阴性对照组；分离出的ＰＢＭＣ加入γＩＬ２，于２５ｍｌ培养瓶中共同孵育９６ｈ，制备ＬＡＫ细胞，然后将其与经不同浓度回生口服液处理后的ＳＭＭＣ７７２１，Ｈｅｌａ细胞株于９６孔微量培养板中共同孵育２０ｈ，用ＬＤＨ释放法测ＬＡＫ细胞活性，同时设空白对照．全部数据采用ｔ检验方法进行处理．结果回生口服液在浓度为１０ｍｇ／ｍｌ以上时能促进ＰＢＭＣ在ＰＨＡ作用下分泌ＩＬ２（Ｐ＜００１），在１ｍｇ／ｍｌ时即能拮抗１％（Ｐ＜００１）、５％（Ｐ＜００５）人血清ＩＬ２抑制物的作用，且都与药物浓度呈正相关，在高浓度（１００ｍｇ／ｍｌ）时还能增强ＬＡＫ细胞的活性（Ｐ＜００１）．结论回生口服液可提高人ＩＬ２水平，并增强ＬＡＫ细胞活性，以实现抗癌作用．     

DNA-天坛痘苗复合型艾滋病疫苗小鼠体内生物分布研究

目的考察DNA-天坛痘苗复合型艾滋病疫苗在小鼠体内生物分布情况。方法采用定量PCR方法分别对复合疫苗免疫后DNA疫苗的分布情况以及复合疫苗组分HIV-痘病毒载体疫苗单独免疫后的生物分布情况进行测定。结果复合疫苗免疫后5d和30d,主要是在注射部位检测到质粒DNA残留,在免疫后第56d,各脏器均未检测到质粒DNA残留。HIV-痘病毒载体疫苗单独免疫后第5d,仅在给药部位检测到DNA残留,免疫后第36d,各脏器均未检测到DNA残留。结论复合疫苗免疫机体后短期只在注射部位分布,且随时间延长减少至消失,不会长期在机体内存留。