miR-122启动子序列的克隆及特异性分析

目的 miRNA- 122启动子序列的预测、克隆及特异性分析.方法 分别从肝癌细胞系Huh-7及HepG2中扩增出预测的miR-122启动子,并将其克隆至含荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)报告基因pGL4.17质粒上,用重组质粒转染Huh-7、HepG2及HeLa细胞,分析启动子的特性.结果 成功预测并克隆出miR-122的启动子序列.重组质粒转染细胞后,启动子能够启动Fluc的表达.用含启动子P1的重组载体pGL4.17-P1转染HeLa细胞后,用两种荧光素酶检测体系测得重组载体中荧光素酶的表达水平显著高于对照组(t =0.000 21,P＜0.01及t=0.000 38,P＜0.01).结论 Huh-7、HepG2细胞中miR-122表达差异与启动子序列缺失无关.而受miR-122启动子调节的报告基因在非肝细胞系(HeLa)中也表达,表明miR-122启动子不具有肝细胞特异性.     

人腺病毒3型感染对H9c2细胞microRNA表达谱的影响

目的研究腺病毒感染对大鼠心肌来源的H9c2细胞microRNA表达谱的影响。方法用人腺病毒3型（Ad3）攻击成层和未成层的H9c2细胞,6h后收获总RNA,基因芯片检测microRNA表达谱。结果比较未成层与成层的H9c2细胞microRNA的表达谱,H9c2细胞成层后有54种microRNA表达显著下调,7种microRNA表达显著上调。与未感染病毒的细胞比较,Ad3感染的未成层H9c2细胞有41种microRNA表达显著下调,12种microRNA表达显著上调。与未感染病毒的细胞比较,Ad3感染成层H9c2细胞后有8种microRNA的表达显著下调,62种microRNA的表达显著上调。结论细胞不同的生长状态及Ad3感染显著改变了H9c2细胞的microRNA表达谱。     

B组柯萨奇病毒感染对H9c2细胞microRNA表达谱的影响

目的 观察B组柯萨奇病毒感染对大鼠心肌来源的H9c2细胞microRNA表达谱的影响.方法 用B组柯萨奇病毒3型Nancy株(CVB3)攻击成层和未成层的H9c2细胞,6h后收获总RNA,基因芯片检测microRNA表达谱.结果 比对未成层与成层的H9c2细胞的microRNA表达谱,H9c2细胞成层后有54种microRNA表达显著下调,7种microRNA表达显著上调.与未感染病毒的未成层细胞比较,CVB3感染的未成层H9c2细胞有35种microRNA表达显著下调,9种microRNA表达显著上调.与成层H9c2细胞比较,CVB3感染成层H9c2细胞后,有20种microRNA的表达显著下调,16种microRNA的表达显著上调.结论 细胞生长状态、CVB3攻击均显著改变了H9c2细胞microRNA表达谱.     

表达海肾荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型质粒的构建及鉴定

目的 构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CVB3),以实现定量检测CVB3.方法 将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置,重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序,评价重组病毒的荧光素酶表达,扩增重组病毒并测定重组病毒株毒力.结果 成功构建2个重组病毒质粒,转染HeLa细胞,表达海肾荧光素酶(humanizedform of Renilla Luc,hRLuc)、荧火虫荧光素酶(firefly luciferase,Luc)的pCVB3-hRLuc和pCVB3-Luc转染后第1代均可检测到hRLuc和Luc活性,但只有pCVB3-hRLuc转染细胞有明显细胞病变.扩增和纯化的CVB3-hRLuc病毒感染HeLa细胞可见明显细胞病变及hRLuc活性.扩增的CVB3-Luc没有观察到明显的细胞病变,且从第2代病毒开始就未能检测到荧光素酶活性.用HeLa细胞经空斑形成试验进行毒力测定,CVB3-hRLuc的毒力为1.4(107 pfu/ml).结论 成功构建了表达hRLuc的重组CVB3毒株CVB3-hRLuc,为定量研究CVB3感染打下基础.     

纳米二氧化钛光催化技术消毒和净化空气的应用研究

目的 研制纳米二氧化钛(TiO2)光催化空气净化消毒器,并测试其空气消毒净化效果.方法 设计和制作纳米TiO2光催化空气净化消毒器样机.在封闭实验室将大肠埃希菌、克雷伯菌制成气雾,比较紫外线和纳米TiO2光催化空气净化消毒器消毒后残余细菌总数.在大型公共场所测试纳米TiO2光催化空气净化消毒器对空气净化和消毒的效率.方法 纳米TiO2光催化空气净化消毒器由粗效过滤器、纳米TiO2光催化反应器、活性炭纤维吸附层、电空气负离子发生器和智能化微处理程序共5部分组成.纳米TiO2光催化法在30 min、60 min、90 min、120 min对空气大肠埃希菌的杀灭率分别为76.0%、81.8%、77.5%、80.7%.纳米TiO2光催化法上述时间点对空气克雷伯菌的杀灭率分别为78.4%、79.5%、67.3%、58.5%;30 min、60 min时间点紫外线对空气克雷伯菌的杀灭率56.1%、63.2%.方法 纳米TiO2光催化空气净化消毒器的空气消毒效果等同或优于紫外线,可用于大型公共场所的空气净化和消毒作用.